[发明专利]猿猴亚家族C腺病毒SAdV-40、-31和-34及其应用

说明书

发明背景

腺病毒是双链DNA病毒，基因组大小约为36千碱基(kb)，由于能够在多种靶组织中实现高效基因转移以及较大的转基因容量，它被广泛用于基因转移应用。通常，腺病毒的E1基因缺失，被取代为由所选启动子、感兴趣基因cDNA序列和聚A信号组成的转基因盒，产生复制缺陷型重组病毒。

腺病毒的形态特征是由三种主要蛋白和许多群体小蛋白VI、VIII、IX、IIIa和Iva2组成的二十面体衣壳，这三种主要蛋白是六邻体(II)、五邻体基质(III)和突结尾丝(knobbed fibre)(IV)[W.C.Russell，J.Gen Virol.，81：2573-3704(2000年11月)]。病毒基因组为线性双链DNA，末端蛋白共价连接于含有末端反向重复(ITR)的5’末端。病毒DNA与高碱性蛋白VII和小肽pX(之前称为mu)密切相连。另一种蛋白V与此DNA-蛋白复合物包装在一起，并通过蛋白VI提供与衣壳的结构连接。该病毒也含有病毒编码的蛋白酶，这种蛋白酶是加工某些结构蛋白以产生成熟的感染性病毒所必需的。

已经开发了一种对包括人、猿猴、牛、马、猪、羊、犬和负鼠腺病毒在内的哺乳动物腺病毒家族进行分类的方法。这种分类方法的开发基础是该家族内的腺病毒序列凝集红血细胞的能力不同。结果得到了六个亚组，现在称为亚组A、B、C、D、E和F。参见T.Shenk等，Adenoviridae：The Viruses and theirReplication(腺病毒科：病毒及其复制)，第67章，选自FIELD′S VIROLOGY(菲尔德病毒学)，第6版，B.N Fields等编，(LR出版社(Lippincott Raven Publishers)，费城，1996)，第111-2112页。

已报道可使用重组腺病毒将异源分子递送至宿主细胞。参见美国专利6,083,716，它描述了两种黑猩猩腺病毒的基因组。猿猴腺病毒C5、C6和C7已经描述于美国专利7,247,472，它可用作疫苗载体。其他黑猩猩腺病毒描述于WO 2005/1071093，可用于制造腺病毒疫苗载体。

本领域需要能有效递送分子到靶点并尽可能降低人群中已有的免疫力对所选腺病毒血清型的影响的载体。

发明概述

本文提供了亚家族C中三种新型猿猴腺病毒的分离的核酸序列和氨基酸序列以及含有这些序列的载体。还提供了许多使用本发明所述载体和细胞的方法。这些腺病毒包括SAdV-40、SAdV-31和SAdV-34。

本文所述方法包括通过给予本发明所述载体将一种或多种所选异源基因递送到哺乳动物患者。用本文所述组合物进行接种能够呈递所选抗原从而引发保护性免疫反应。基于这些猿猴腺病毒的载体也可用于在体外制造异源基因产物。这种基因产物本身可用于各种目的，例如本文所述的。

本文将更加详细地描述本发明的这些和其他实施方式以及优点。

具体实施方式

本发明提供了全部分离自黑猩猩排泄物的猿猴腺病毒40、SAdV-31和SAdV-34的新的核酸和氨基酸序列。

还提供了新型腺病毒载体和产生基于这些序列的载体的包装细胞系，用于在体外产生重组蛋白质或片段或其它制剂。本发明还提供了用于递送治疗或疫苗目的的异源分子的组合物。这些治疗性或疫苗组合物含有携带插入的异源分子的腺病毒载体。此外，所述新型SAdV序列可用于提供产生重组腺相关病毒(AAV)载体所必需的辅助功能。因此，提供了在此种产生方法中利用这些序列的辅助构建物、方法和细胞系。

由于这些病毒来自亚组C，可将腺病毒亚组C衣壳递送给对象从而将这些病毒的衣壳(任选完整的或重组的病毒颗粒或空衣壳)用于诱导免疫调节效应或增强的免疫应答的方法。SAdV-40、SAdV-31或-34衣壳可单独递送或与活性剂组合递送以增强其免疫应答。在另一方面，提供了在有此需要的对象中诱导产生干扰素α的方法，包括递送SAdV-40、SAdV-31或SAdV-34衣壳到对象。再在另一个方面，提供了在培养物中产生一种或多种细胞因子的方法。该方法包括在适合产生包括干扰素α等在内的细胞因子/趋化因子的条件下培养含有树突细胞和本文所述SAdV衣壳的培养物。

术语“基本上同源”或“基本上相似”指核酸或其片段时，表示当任选地将含相应核苷酸插入或缺失的序列与另一核酸(或其互补链)排列对比时，对比的序列至少约95-99％核苷酸序列相同。