[发明专利]用活体外扩增的CD4+CD25+调节性T细胞降低移植物抗宿主病效应的方法

权利要求书

1.一种用活体外扩增的CD4+CD25+调节性T细胞减少移植物抗宿主病效应的方法，包括以下步骤：

从人供体提取含有外周血单核细胞的样品，其中所述外周血单核细胞含有CD4+CD25+调节性T细胞；

富集所述样品中的CD4+CD25+调节性T细胞以产生富集的CD4+CD25+调节性T细胞；

扩增所述富集后的CD4+CD25+调节性T细胞群；以及

将所述扩增的CD4+CD25+调节性T细胞的一部分施用于人体以治疗移植物抗宿主病。

2.根据权利要求1所述的方法，其中富集所述调节性T细胞的步骤包括从全血中分离所述外周血单核细胞的步骤。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述分离外周血单核细胞的步骤包括密度梯度离心法。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述富集CD4+CD25+调节性T细胞的步骤包括通过用抗体去除非CD4细胞来对CD4+细胞进行阴性分离的步骤。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述富集CD4+CD25+调节性T细胞的步骤包括用抗人CD25抗体对CD4+CD25+细胞进行阳性分离的步骤。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述扩增群体的步骤实施至少一周，但少于三周。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述扩增群体的步骤实施约两周。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述富集CD4+CD25+调节性T细胞的步骤产生富集的样品，相对于所述富集样品中的总细胞群，所述富集的样品的40％到78％为CD4+CD25+调节性T细胞。

9.根据权利要求8所述的方法，其中在所述扩增群体的步骤后，相对于所述总细胞群，所述样品的40％到78％为CD4+CD25+调节性T细胞。

10.根据权利要求8所述的方法，其中所述样品中所述CD4+CD25+调节性T细胞的所述浓度在扩增前和扩增后在约10％的范围内相等。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述富集的CD4+CD25+调节性T细胞包括源自第三方的人Treg细胞。

12.一种用活体外扩增的CD4+CD25+调节性T细胞减少移植物抗宿主病效应的方法，包括以下步骤：

富集样品中的CD4+CD25+调节性T细胞，从而产生富集的CD4+CD25+调节性T细胞；

扩增所述分离的CD4+CD25+调节性T细胞的群体，其中所述样品中所述CD4+CD25+调节性T细胞的纯度在扩增前和扩增后在约10％的范围内相等，以及

将所述扩增的CD4+CD25+调节性T细胞的一部分施用于人体以治疗移植物抗宿主病。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述扩增群体的步骤实施至少一周，但少于三周。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述扩增群体的步骤实施约两周。

15.根据权利要求12所述的方法，其中所述扩增数量的步骤实施足够的时间以获得细胞群的倍数变化，范围从不小于30倍的增长到不大于300倍的增长。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述倍数变化为不小于80倍的增长并且不大于150倍的增长。

17.根据权利要求12所述的方法，其中所述富集的CD4+CD25+调节性T细胞包括源自第三方的人Treg细胞。

18.一种含有复数种细胞的活体外细胞样品，其至少40％为CD4+CD25+调节性T细胞。

19.根据权利要求18所述的细胞样品，其中所述CD4+CD25+调节性T细胞表达Foxp3。

20.根据权利要求19所述的细胞样品，其中所述CD4+CD25+调节性T细胞表达CD27、CD25、CTLA4、GITR、HLA-DR、CD39、CD62L、CCR4、CD49d和intergrinp7。

21.根据权利要求20所述的细胞样品，其中所述CD4+CD25+调节性T细胞不表达CCR5、CCR 6、CCR8、CLA和CD106。