[发明专利]用于高水平生产二十碳五烯酸的优化解脂耶氏酵母菌株

权利要求书

1.用于生产二十碳五烯酸的重组耶氏酵母菌种生产宿主细胞，所述细胞包含：

a)至少一种编码Δ9延伸酶的基因，所述延伸酶具有选自SEQ IDNO：5、7、9、11、13、15和17的氨基酸序列；

b)至少一种编码Δ8去饱和酶的基因，所述去饱和酶具有选自SEQ ID NO：19、21、23、25、27、29、31和33的氨基酸序列；

并且

其中所述耶氏酵母菌种生产宿主细胞生产按所述生产宿主细胞中总脂肪酸重量％计至少约43.3重量％的二十碳五烯酸。

2.根据权利要求1的重组生产宿主，其中所述至少一种编码Δ9延伸酶的基因或所述至少一种编码Δ8去饱和酶的基因在解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)启动子的控制下。

3.根据权利要求2的重组生产宿主，其中所述解脂耶氏酵母启动子选自：GPD、GPDIN、GPM、GPM/FBAIN、FBA、FBAIN、FBAINm、GPAT、YAT1和EXP1。

4.根据权利要求1的重组生产宿主，其中所述至少一种编码Δ9延伸酶的基因或所述至少一种编码Δ8去饱和酶的基因在耶氏酵母终止子的控制下，所述终止子选自：Aco3、Pox3、Pex20、Pex16、Lip1、Lip2和OCT。

5.根据权利要求1的重组耶氏酵母菌种生产宿主细胞，其中所述至少一种编码Δ9延伸酶的基因有至少五个拷贝。

6.根据权利要求1的重组耶氏酵母菌种生产宿主细胞，其中所述至少一种编码Δ8去饱和酶的基因有至少五个拷贝。

7.用于生产包含二十碳五烯酸的微生物油的方法，所述方法包括：

a)培养权利要求1的生产宿主，其中生产包含二十碳五烯酸的微生物油；以及

b)任选地回收步骤(a)的微生物油。

8.具有按总脂肪酸的重量％计至少约25重量％的二十碳五烯酸的微生物油。

9.权利要求8的微生物油，所述微生物油具有按总脂肪酸的百分比计小于1重量％的γ-亚麻酸。

10.包含按总脂肪酸的重量％计至少约30重量％的二十碳五烯酸和小于约25重量％的亚油酸的微生物油。

11.包含按总脂肪酸的重量％计至少约50重量％的ω-3多不饱和脂肪酸的微生物油。

12.具有按总脂肪酸的重量％计的以下脂肪酸浓度的微生物油：

a)约48至约55重量％的二十碳五烯酸；

b)约1.5至约3.0重量％的二十碳四烯酸；

c)约0.1至0.7重量％的花生四烯酸；

d)约1.0至约2.5重量％的二高-γ-亚麻酸；

e)约2.0至约3.5重量％的二十碳二烯酸；

f)约2.0至约3.0重量％的α-亚麻酸；

g)约17.0至约20.0重量％的亚油酸(18:2)；

h)约3.5至约6.5重量％的油酸(18:1)；

i)约1.0至约2.0重量％的硬脂酸(18:0)；

j)约0.5至约3.5重量％的棕榈油酸(16:1)；和

k)约2.5至约4.5重量％的棕榈酸(16:0)。

13.具有按总脂肪酸的重量％计的以下脂肪酸浓度的微生物油：

a)至少约43.3重量％的二十碳五烯酸；

b)小于约23.6重量％的亚油酸(18:2)；和

c)小于约9.4重量％的油酸(18:1)。

14.权利要求13的微生物油，所述微生物油还包含按总脂肪酸的重量％计小于约4.2重量％的二十碳二烯酸。

15.油浓缩物，其来源于权利要求13的油。

16.权利要求15的油浓缩物，其中所述油包含按总脂肪酸的重量％计至少约60重量％的二十碳五烯酸。

17.权利要求15的油浓缩物，其中所述油包含按总脂肪酸的重量％计至少约70重量％的二十碳五烯酸。

18.权利要求15的油浓缩物，其中所述油包含按总脂肪酸的重量％计至少约80重量％的二十碳五烯酸。