[发明专利]提高免疫反应性的方法

说明书

本发明涉及用于调节细胞的免疫应答的方法。

通过利用成本低且高效的内源性防御机制，主动免疫接种首次使得能够广泛防治最具威胁性的传染病，并且甚至在一些情况下实现了全球性根除所述传染病。因此，已进行了努力并且还将进行努力以针对各种适应症开发预防性和治疗性的疫苗接种方法。然而，有效的接种取决于导致获得保护性免疫力的免疫应答的诱导。但是，免疫接种抗原缺乏免疫原性导致没有取得所期望的效果。已经开发出了高度令人关注的特异性抗原制剂以用于预防和治疗疟疾、HIV、流感或者肿瘤疾病(仅为了列举几个突出的例子)。然而，这些疗法并不成功，这例如是由于免疫接种抗原缺乏免疫原性。此外，即使广泛使用的疫苗也导致缺乏免疫原性的问题，例如仅对于大约80％的受治疗者建立起真正保护性的免疫应答滴度的乙型肝炎疫苗。免疫系统缺乏反应性的主要原因是，这些抗原没有被识别为“外源的”。在哺乳动物中，主要是T-细胞决定将由抗原呈递细胞(APC)所呈献的结构识别为内源的还是外源的。为了诱导免疫应答，基本上需要两个分开的且相互独立的信号。该机制应当防止免疫系统的过度出击。首要的前提是，T-细胞受体也识别由APC所呈献的抗原。如果并非这种情况，则不会发生进一步的反应。此外，为了诱导免疫应答，绝对必不可少的是T-细胞表面上的CD28受体与B7的相互作用，只有当APC将所述抗原结构归类为危险时，B7才表达在APC上。在使用仅具有边缘免疫原性的接种抗原进行疫苗接种的情况下，通过B7和CD28之间的相互作用的共刺激可能不会发生，这继而不引起免疫应答，而是导致出现在T-细胞水平上的耐受。然而，能够证明，可以通过关闭E3-遍在蛋白连接酶Cbl-b而规避对于共刺激的需要。该酶是在免疫反应性的控制中的决定性转换点(Chiang等人，J Clin Invest(2007)doi：10.1172/JCI29472)。在Cbl-b不存在时，所施用的几乎没有免疫原性的物质也可以导致诱导出强烈的免疫应答。此外，Cbl-b缺陷型小鼠(纯合基因敲除)是能存活的，并且它们的免疫系统能够有效地识别自体诱导的肿瘤，并针对其建立主要基于CD8+T-细胞的裂解性免疫应答(Loeser等人，JEM(2007)doi：10.1084/iem.20061699)。然而，在用超级抗原进行免疫接种后，该酶的所描述的完全关闭也导致增加的自身免疫。因此，Loeser等人可以证明，作为负调节物的Cbl-b决定性地负责T-细胞的“免疫反应性”。

对于Cbl-b也已经描述了用于减弱特定基因表达的siRNA技术，具有较低的效率。US 2007/0087988涉及用于调节HPK1的方法，所述HPK1的表达可以通过提高Cbl-b表达而得到提高，反之亦然(例如，通过Cbl-b siRNA抑制)。

US 2007/0054355描述了Cbl-b肽和Cbl-b相关蛋白，特别是POSH，以及其用于治疗Cbl-b相关疾病的用途。

WO 2004/078130 A2涉及用于治疗POSH相关疾病(例如，病毒性疾病、癌症或神经学病症)的组合物。POSH可以尤其与许多POSH相关蛋白(包括Cbl-b)一起成为可供使用的。

US 2006/0292119A1涉及用于通过抑制细胞中的负免疫调节剂来提高免疫细胞的免疫应答的方法。此类负免疫调节剂选自与分子稳定性有关(例如通过遍在蛋白化、脱遍在蛋白作用和苏素化)的蛋白质，以及选自诱导NFkB-抑制剂表达的转录因子，或者NFkB-靶基因的转录的阻抑子。

然而，还没有描述Cbl-b介质的适合于临床应用的使用。因此，本发明的一个目的是提供可供使用的用于调节免疫反应性的实际适用的方法。

因此，本发明涉及用于提高接触过抗原的免疫系统细胞的免疫反应性的体外或离体方法，包括降低或者抑制这些细胞的Cbl-b功能，从而提高所述细胞针对该抗原的免疫反应性。

在现有技术中已经详细描述了Cbl-b基因及其基因产物(UniGene Id.Hs.3144和Hs.381921)。Cbl-b序列已经公开，例如在GenBank数据库中，登录号为NM_008279和NP_009112。抗-Cbl-b抗体、siRNA和反义抑制剂均是商业上可得的。例如在US2007/0054355中公开了某些适合于降低或抑制Cbl-b表达并因此降低或抑制Cbl-b功能的siRNA，所述siRNA具有混合的RNA/DNA核苷酸以及大约20个碱基的长度。