[发明专利]神经生长因子偶联物及其用途

说明书

技术领域

本发明属于医学、公共卫生、免疫学、分子生物学和病毒学领域。本发明提供包含与至少一种抗原连接的病毒样颗粒(VLP)的组合物，其中所述抗原是NGF抗原。本发明还提供制备所述组合物的方法。本发明的组合物和方法可以用于生产疫苗，特别是用于治疗慢性疼痛。而且，本发明的组合物能够诱导有效的免疫应答，特别是抗体应答。

背景技术

神经生长因子(NGF)也被称为NGFβ，是一种神经营养因子和神经营养蛋白家族的成员，除NGF以外，该家族还包括脑衍生的神经营养因子(BDNF)、神经营养蛋白3和神经营养蛋白4/5(Pezet和McMahon，Annu.Rev.Neurosci.29：507-38(2006))。如同所有神经营养蛋白一样，NGF表达为大约27kDa的蛋白原，并且被切割为大约14kDa的成熟形式(Edwards等人，J Biol Chem.263(14)：6810-5(1988)；Seidah等人，Biochem J.314：951-60(1996))。这种成熟形式通过结合两种受体发挥其生物功能：共同受体p75^NTR，该受体以低亲和力结合所有神经营养蛋白，和高亲和力原肌球蛋白受体激酶A(trkA)受体。TrkA是受体酪氨酸激酶，它在配体结合时二聚化，并且激活不同的信号途径(Patapontian和Reichardt，Curr Opin Neurobiol.11(3)：272-802001))。在早期发育过程中，被NGF-trkA相互作用激活的这些信号途径阻断细胞凋亡并且促进伤害感受系统的感觉神经元的存活和神经生长(Patel等人，Neuron 25(2)：345-57(2000))。在出生后，这些神经元的存活对NGF的依赖性降低，但是在出生后时期NGF继续对伤害性感受器发挥深刻的生物学效应。它调节神经递质、受体和电压门控性离子通道的表达，由此控制伤害性感受器的响应性。NGF的另一功能上重要的作用是通过翻译后控制使伤害性感受器响应敏感，这导致瞬时感受器电位香草酸受体1(TRPV1)离子通道的响应性增强(Pezet和McMahon，Annu.Rev.Neurosci.29：507-38(2006))。

NGF由于其在调节成人中伤害性感受器响应性中的作用，参与动物和人的痛觉的介导。皮下或肌肉注射少量NGF导致持续数日的疼痛和压痛(Pezet和McMahon，Annu.Rev.Neurosci.29：507-38(2006))。在人体中，NGF水平与疼痛强度之间的相关性可在大量疼痛条件如慢性前列腺炎(Miller等人，Urology，2002.59(4)：603-8(2002))、间质性膀胱炎(Lowe等人，Br J Urol.79(4)：572-7(1997))等中进行评估。基本上，可以区别两种类型的疼痛：伤害性疼痛和神经性疼痛。伤害性疼痛由组织损伤引起的伤害性感受器的刺激引起，例如在炎症过程中、损伤或手术切口后，而神经性疼痛来源于神经系统本身的病理，例如在神经受压迫或创伤后，或在影响感觉神经元的感染或自身免疫后。

在炎症过程中，NGF作为产生疼痛的炎症介质起作用。它是由外周的大量不同细胞型产生的，如角质形成细胞、上皮细胞、平滑肌细胞和许旺细胞，以及在炎症过程中，特别是由肥大细胞和巨噬细胞产生的。NGF水平在动物和人的炎症和慢性疼痛状况下显著升高。已经在大量啮齿类动物伤害性疼痛模型中证明，NGF的阻断显著降低疼痛敏感性。例如，它降低皮下注射CFA后的热和机械痛觉过敏(Woolf等人，Br.J.Pharmacol.121(3)：417-24(1997)并且抑制关节炎相关的疼痛(Shelton等人，Pain 116(1-2)：8-16(2005))和骨癌痛(Sevcik等人，Pain115(1-2)：128-41(2005))。尽管NGF在神经性疼痛中的作用没有在炎症疼痛中的作用那么确定，但是一些研究小组也已经表明在啮齿类动物神经性疼痛模型中成功进行了抗NGF治疗(Ramer等人，Neurosci.Lett.251(1)：53-6(1998)，Ramer等人，Eur.J.Neurosci.11(3)：837-46(1999))。

美国专利5,147,294请求保护NGF拮抗剂，尤其是NGF单克隆抗体，用于治疗疼痛的用途。自此以后，已申请了大量的专利来请求保护抗NGF单克隆抗体在治疗慢性疼痛中的用途。