[发明专利]使用人工微RNA下调基因表达

权利要求书

1.包含前体miRNA的分离的核酸片段，所述前体miRNA基本上对应于如SEQ ID NO：11所示的脱氧核糖核苷酸序列(i)其中SEQ IDNO：11的核苷酸430至450被第一可变核苷酸亚序列置换，取决于要减少表达的靶序列，所述第一可变核苷酸亚序列的大小在约19至约30个核苷酸的范围内，以及(ii)进一步地，其中SEQ ID NO：11的核苷酸244至264被第二可变核苷酸亚序列置换，所述第二可变核苷酸亚序列的大小在约19至约30个核苷酸的范围内，所述第二可变核苷酸亚序列能够与所述前体miRNA的第一可变亚序列杂交。

2.包含权利要求1的分离的核酸片段的重组构建体，所述分离的核酸片段与至少一种调控序列可操作地连接。

3.包含权利要求2的重组构建体的植物细胞。

4.权利要求3的植物细胞，其中所述植物细胞是单子叶植物细胞。

5.减少植物细胞中靶序列表达的方法，所述方法包括：

(a)用核酸构建体转化至少一种植物细胞，所述核酸构建体包含前体miRNA，所述前体miRNA基本上对应于如SEQ ID NO：11所示的脱氧核糖核苷酸序列(i)其中SEQ ID NO：11的核苷酸430至450被第一可变核苷酸亚序列置换，取决于要减少表达的靶序列，所述第一可变核苷酸亚序列的大小在约19至约30个核苷酸的范围内，以及(ii)进一步地，其中SEQ ID NO：11的核苷酸244至264被第二可变核苷酸亚序列置换，所述第二可变核苷酸亚序列的大小在约19至约30个核苷酸的范围内，所述第二可变核苷酸亚序列能够与所述前体miRNA的第一可变亚序列杂交；以及

(b)选择那些转化的植物细胞，所述转化的植物细胞的靶序列的表达水平与野生型植物细胞中的靶基因的表达水平相比被减少。

6.权利要求5的方法，其中所述植物细胞是单子叶植物细胞。

7.包含前体miRNA的分离的核酸片段，所述前体miRNA基本上对应于如SEQ ID NO：12所示的脱氧核糖核苷酸序列(i)其中SEQ IDNO：12的核苷酸94至114被第一可变核苷酸亚序列置换，取决于要减少表达的靶序列，所述第一可变核苷酸亚序列的大小在约19至约30个核苷酸的范围内，以及(ii)进一步地，其中SEQ ID NO：12的核苷酸163至183被第二可变核苷酸亚序列置换，所述第二可变核苷酸亚序列的大小在约19至约30个核苷酸的范围内，所述第二可变核苷酸亚序列能够与所述前体miRNA的第一可变亚序列杂交。

8.包含权利要求7的分离的核酸片段的重组构建体，所述分离的核酸片段与至少一种调控序列可操作地连接。

9.包含权利要求8的重组构建体的植物细胞。

10.权利要求9的植物细胞，其中所述植物细胞是单子叶植物细胞。

11.减少植物细胞中靶序列表达的方法，所述方法包括：

(a)用核酸构建体转化至少一种植物细胞，所述核酸构建体包含前体miRNA，所述前体miRNA基本上对应于如SEQ ID NO：12所示的脱氧核糖核苷酸序列(i)其中SEQ ID NO：12的核苷酸94至114被第一可变核苷酸亚序列置换，取决于要减少表达的靶序列，所述第一可变核苷酸亚序列的大小在约19至约30个核苷酸的范围内，以及(ii)进一步地，其中SEQ ID NO：12的核苷酸163至183被第二可变核苷酸亚序列置换，所述第二可变核苷酸亚序列的大小在约19至约30个核苷酸的范围内，所述第二可变核苷酸亚序列能够与所述前体miRNA的第一可变亚序列杂交；以及

(b)选择那些转化的植物细胞，所述转化的植物细胞的靶序列的表达水平与野生型植物细胞中的靶基因的表达水平相比被减少。

12.权利要求11的方法，其中所述植物细胞是单子叶植物细胞。