[发明专利]通过抗原和/或药物连接增加免疫应答及靶向

说明书

本发明涉及共价连接于抗原和/或药物的激活NKT细胞的糖脂。

本发明涉及化合物，其由经连接子共价连接于抗原或药物的糖脂构成。所述的化合物能够诱导比包含分开的糖脂和抗原的组合物更强的免疫应答。所述的化合物还能将药物靶向至CD1d限制性细胞。

天然杀伤T细胞(“NKT细胞”)是天生样记忆/效应子细胞的群体，其表达天然杀伤(NK)受体以及保守的、半-不变T细胞受体(TCR)。NKT细胞已经在抑制自身免疫和移植物排斥、促进对病原体的抗性以及促进肿瘤免疫性之中有所牵涉。

NKT细胞在TCR激活数小时内应答强烈的细胞因子产生，通过释放包括IFN-γ和TNF的T_H1-型细胞因子，以及包括IL-4和IL-13的T_H2-型细胞因子。对这些淋巴因子响应的调制是用于免疫原性组合物中佐剂的主要预期效应。

NKT细胞识别由β2微球蛋白相关分子家族的CD1d成员呈递的外来和自身脂抗原。已经显示多种具有不同结构的脂质与CD1d分子以独特方式结合，CD1d分子两个疏水结合口袋(A’和F)中每个容纳一个脂肪酸链。能够结合CD1d分子的脂质种类包括分枝菌酸、二酰甘油、鞘脂、多萜醇、脂肽、phosphomycoketide和小的疏水化合物。

大量天然的和合成的脂分子是由抗原-呈递细胞加工并由CD1分子呈递至NKT细胞的。用于研究体外和体内NKT细胞激活的原型化合物是KRN7000，以及衍生自海生海绵体海绵(Agelas mauritianus)的α-半乳糖苷神经酰胺(“αGalCer”)。其他最近鉴别的化合物包括异球三己糖基神经酰胺(isoglobotrihexosylceramide，″iGB3″)，其是在PCT专利申请WO2006/029010中描述的内源糖脂，以及PBS-57(修饰的6”氨基-6”脱氧半乳糖苷神经酰胺)，其在PCT申请PCT/US2007/066250中有所描述，并入本文作为参考。这些化合物激活NKT细胞并上调体外和体内的细胞因子应答。因此，有建议使用这些化合物作为佐剂以在与抗原共施用时改善疫苗效力(PCT专利申请WO2006/083671)。

在免疫接种的情况下，抗原必须分别通过I类或II类MHC分子由抗原呈递细胞(APC)，具体而言是树突细胞(DC)呈递至常规CD8+和CD4+T细胞，以诱导对于此抗原的特异性免疫应答。是此目的，在静息树突细胞呈递α-半乳糖苷神经酰胺至NKT细胞时，起始NKT细胞和树突细胞的相互激活，诱导NKT细胞上调CD40L和Th1、Th2细胞因子以及趋化因子。然后CD40交联诱导树突细胞上调CD40、B7.1和B7.2以及IL-12，其反过来增强NKT细胞激活和细胞因子产生。此反应的传播涉及到NK细胞的细胞溶解的激活以及IFN-γ产生，以及，最重要的是树突细胞共刺激特性和I类MHC、II类MHC-介导的抗原呈递的上调。

已经建议将直接连接于报告子基团如荧光团或其他小分子(例如，生物素)的糖脂作为用于观察糖脂与CD1d和NKT细胞结合的探针(PCT专利申请WO2004/094444)。具体而言，附加6”氨基-6”脱氧-半乳糖苷神经酰胺的荧光团和生物素已被用于理解糖脂结构在CD1d和NKT细胞受体结合中的作用。染色使得能对糖脂的运输进行观察以及对其与CD1d和NKT细胞受体的结合进行定量(Zhou等人，Org.Lett.20004：1267-1270)。已经发现丹酰基-、氟硅酸钠衍生物，以及附加生物素的6”-氨基酸-6”-脱氧-半乳糖苷神经酰胺与亲本糖脂类似地刺激NKT细胞，显示了这些化合物发生内吞作用、CD1d加载、在细胞表面的呈递以及对T细胞受体的结合(引起T细胞刺激)。然而，Zhou等人将小分子附加到糖脂上用于标记NKT细胞和/或CD1d限制性细胞。还不知道在脂链上添加更大分子是否会干扰与CD1d的结合。进一步地，还迄今没有报道与抗原或药物结合的糖脂。

发明详述

惊人地，发明人已经发现由经连接子共价结合于抗原的糖脂构成的化合物能够引发针对此抗原的特异性免疫应答，比当此糖脂和抗原在一个组合物中分开共施用时观察到的应答更强。

不受限与理论，认是在抗原和NKT拮抗剂共递送至相同APC时，优选地相同B淋巴细胞或相同DC时，此B细胞和/或DC由NKT细胞激活，抗原因此由完全激活的B细胞和/或DC呈递至常规T细胞。接近被激活的NKT在APC将抗原呈递至T细胞时是有用的，因是这会有助于细胞因子环境。

另外，当糖脂共价结合于药物时，糖脂使得此药物能特异性靶向NKT细胞。