[发明专利]绿脓杆菌的Ⅲ型分泌系统构成蛋白质PA1698

说明书

技术领域

本发明涉及针对绿脓杆菌的III型分泌系统构成蛋白质PA1698的抗体和含有该抗体的药物组合物，绿脓杆菌感染症诊断剂，绿脓杆菌感染症治疗剂，和绿脓杆菌的检测试剂盒。此外，本发明还涉及含有PA1698蛋白质或其肽作为抗原的疫苗组合物。

背景技术

绿脓杆菌(铜绿假单孢菌(Pseudomonas aeruginosa))是广泛分布于土壤、水等自然环境中的革兰氏阴性杆菌，其引起抵抗治疗的严重致命感染。绿脓杆菌的主要目标是包括烫伤、器官移植或癌症患者在内的，一般被称为易感染宿主(compromised host)的生物体防御功能衰弱的易感染性患者，绿脓杆菌是院内感染的主要病原菌。此外，由这种细菌引起的肺部感染症对囊性纤维化患者是致命的。对这些患者主要施用具有抗绿脓杆菌活性的抗菌剂，而众多病例则因绿脓杆菌耐药性而未能获得充分的治疗效果。另外，人们也早已对绿脓杆菌的疫苗或抗体进行了研究。然而，直接使用该细菌灭活形式的方法具有缺点，即必须根据绿脓杆菌的不同血清型制备不同类型的疫苗或抗体。

在这种情况下，期待利用具有绿脓杆菌菌株间共同氨基酸序列的绿脓杆菌来源的蛋白主动免疫或被动免疫来预防或治疗绿脓杆菌感染。作为将绿脓杆菌来源的蛋白质应用于疫苗的实例，已知有外膜蛋白质OprF和OprI的部分融合的重组蛋白(日本特开第245699/1996号公报)和IV型菌毛蛋白(WO2004/099250)。

就以绿脓杆菌来源的蛋白质作为靶向的抗体药物，目前已经报道了，抗IV型菌毛蛋白抗体(WO2004/099250号公报)、抗PA1706(或PcrV)抗体(US6309651号公报和US6827935号公报)、抗PA5158抗体(WO2007/049770号公报)、抗PA0427抗体(WO2007/114340号公报)等。

然而，在显示多样血清型的绿脓杆菌临床分离株间共同拥有的菌体来源的蛋白由于可以作为“绿脓杆菌共同抗原”应用于预防、诊断或治疗绿脓杆菌感染症，因此一直是需要的。

由PA1698(或PopN)基因(Genebank登录号AF010150)编码的PA1698蛋白质是构成绿脓杆菌的III型分泌系统的蛋白质(Journal ofBacteriology，2007，189，2599-2609)。所谓III型分泌系统，是病原细菌使病原因子直接移行到宿主细胞质内时使用的系统，由约30种蛋白质构成。这其中，已经报道了抗PA1706(或PcrV)抗体有防御感染作用(US6309651号公报、US6827935号公报)。

然而，并不知道PA1698蛋白质在株间发生何种程度变异，没有使用该蛋白质或部分肽作为疫苗的成分的例子，也没有使用由该蛋白质或部分肽产生的抗体作为感染治疗药或诊断剂的例子。

发明内容

本发明的课题在于提供具有实质上预防或治疗绿脓杆菌感染能力的抗体和疫苗组合物，它们能够应对来自绿脓杆菌感染患者的临床分离株的多样性。

本发明人为了解决上述课题，试图从绿脓杆菌的外膜蛋白质中探寻新的有用的“绿脓杆菌共同抗原”，进行了各种研究，结果通过基因芯片(GeneChip)分析发现，编码绿脓杆菌的III型分泌系统构成蛋白质PA1698(又名PopN)蛋白质的基因无论是否存在人血清，都稳定地表达(实施例1)。此外，还对93株绿脓杆菌临床分离株实施了基因分析，令人惊奇的是，PA1698蛋白质在约70％的临床分离株中氨基酸序列完全保守，余下的约30％的临床分离株中也只发现1、2处氨基酸变异(实施例2)。此外，还确认了，通过免疫PA1698重组蛋白质获得的抗体与PA1698蛋白质结合(实施例7～9)、该抗体呈现细胞损伤性抑制作用(实施例10)、该抗体在绿脓杆菌感染模型小鼠中呈现高防御感染效果(实施例11和12)。

也就是说，本发明发现，绿脓杆菌的III型分泌系统构成蛋白质PA1698蛋白质作为绿脓杆菌共同抗原是有用的，针对该抗原的抗体与绿脓杆菌结合，能够对绿脓杆菌感染发挥优异的防御效果，从而完成了本发明。

本发明更详细的是，涉及以下的发明。

<1>与绿脓杆菌来源的PA1698蛋白质结合的抗体或其功能片段。

<2>根据<1>所述的抗体或其功能片段，其中绿脓杆菌来源的PA1698蛋白质为以下(i)或(ii)中所述的蛋白质：

(i)含有序列号2所示的氨基酸序列的蛋白质；