[发明专利]方法和组合物

权利要求书

1.tRNA合成酶，其能够结合N^ε-乙酰赖氨酸。

2.如权利要求1所述的tRNA合成酶，其中所述合成酶包含与MbPylRS氨基酸序列具有至少90％序列同一性的多肽。

3.如权利要求2所述的tRNA合成酶，其中所述tRNA合成酶包含对应于MbPylRS中至少L266至C313的氨基酸序列或与其具有至少90％同一性的氨基酸序列。

4.如权利要求3所述的tRNA合成酶，其中所述多肽包含相对于野生型MbPylRS序列而言在L266、L270、Y271、L274或C313中的一个或多个位置的突变。

5.如权利要求4所述的tRNA合成酶，其中所述至少一个突变在L270、Y271、L274或C313位置。

6.如权利要求5所述的tRNA合成酶，其中所述至少一个突变在L270、L274或C313位置。

7.如前述任一项权利要求所述的tRNA合成酶，其包含Y271L。

8.如前述任一项权利要求所述的tRNA合成酶，其包含Y271F。

9.如前述任一项权利要求所述的tRNA合成酶，其包含L266V。

10.如前述任一项权利要求所述的tRNA合成酶，其包含L270I、Y271L、L274A和C313F。

11.如前述任一项权利要求所述的tRNA合成酶，其包含L266V、L270I、Y271F、L274A和C313F。

12.一种核酸，其包含编码前述任一项权利要求所述的多肽的核苷酸序列。

13.权利要求1-11中任一项所述的多肽向tRNA负载N^ε-乙酰赖氨酸的应用。

14.如权利要求13所述的应用，其中所述tRNA包含MbtRNA_CUA。

15.制备包含N^ε-乙酰赖氨酸的多肽的方法，所述方法包括安排翻译编码所述多肽的RNA，其中所述RNA包含琥珀密码子，其中所述翻译在权利要求1-11中任一项所述的多肽存在下、能够负载N^ε-乙酰赖氨酸的tRNA存在下、且N^ε-乙酰赖氨酸存在下进行。

16.如权利要求15所述的方法，其中所述翻译在脱乙酰化抑制剂存在下进行。

17.如权利要求16所述的方法，其中所述抑制剂包含烟酰胺(NAM)。

18.制备包含N^ε-乙酰赖氨酸的多肽的方法，所述方法包括修饰编码所述多肽的核酸，以在对应于所述多肽中需要掺入N^ε-乙酰赖氨酸的位置的一个或多个位置提供琥珀密码子。

19.如权利要求18所述的方法，其中修饰所述核酸包括将编码赖氨酸的密码子突变为琥珀密码子(TAG)。

20.一种均质重组蛋白，其包含N^ε-乙酰赖氨酸。

21.如权利要求20所述的均质重组蛋白，其中所述蛋白通过权利要求15-19中任一项所述的方法制备。

22.一种载体，其包含权利要求12所述的核酸。

23.如权利要求22所述的载体，其中所述载体还包含编码所述tRNA合成酶的tRNA底物的核酸序列。

24.如权利要求23所述的载体，其中所述tRNA底物由MbPylT基因编码。

25.一种细胞，其包含权利要求12所述的核酸，或包含权利要求22-24中任一项所述的载体。

26.如权利要求25所述的细胞，其还包含失活的脱乙酰化酶基因。

27.如权利要求26所述的细胞，其中所述失活的脱乙酰化酶基因包括缺失或破坏的CobB。

28.一种试剂盒，其包含权利要求22-24中任一项所述的载体或包含权利要求25-27中任一项所述的细胞，和一定量的烟酰胺。