[发明专利]启动子检测及分析

权利要求书

1.一种检测DNA调节序列的方法，包括：a)将启动子序列候选物插入至载体中，其中所述载体包含TAG序列且其中将所述启动子序列候选物插入一位置以驱动所述TAG序列转录；b)将含有所述插入的启动子序列候选物的所述载体插入至克隆宿主细胞中；c)使含有不同启动子序列候选物的克隆宿主细胞生长至相同光密度并集中，提取其中的所述载体、纯化并插入至报告细胞系中；d)自所述报告细胞系提取mRNA，其中所述mRNA直接进行标记或用作cDNA或探针合成的模板；及e)用阵列对所述经标记的mRNA、cDNA或探针进行分析，其中所述阵列包含与所述TAG序列相同或互补的序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述载体是质粒。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述TAG序列为约16个碱基对至约200个碱基对。

4.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(a)还包括将多个启动子序列候选物插入至多个载体中，其中每个载体包含独特的TAG序列。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述克隆宿主细胞位于单个反应小瓶中，其中对来自所述克隆宿主细胞内的载体进行纯化，并将约等量的经纯化载体转移至报告细胞系中。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述克隆宿主细胞位于单独的反应小瓶中，其中对来自各单独的反应小瓶中的所述克隆宿主细胞的DNA进行纯化，其中将来自各克隆宿主细胞的经纯化DNA以等摩尔量集中并将其中的载体插入至报告细胞系中。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述cDNA或探针含有标记。

8.根据权利要求1所述的方法，其中对所述mRNA直接进行标记。

9.根据权利要求1所述的方法，其中用阵列对所述mRNA进行分析，其中所述阵列包含与所述TAG序列互补的序列，其中所述互补序列是反义链。

10.根据权利要求1所述的方法，其中用阵列对所述cDNA进行分析，其中所述阵列包含与所述TAG序列的cDNA互补的序列，且其中所述互补序列是正义链。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述经标记的mRNA、cDNA或探针与所述阵列杂交且所述mRNA、cDNA或探针的标记具有可检测反应。

12.根据权利要求1所述的方法，其中插入所述DNA启动子序列候选物的所述载体包含TAG序列、一个或多个多克隆位点、一种或多种DNA重组序列、阴性选择标记、RNA聚合酶启动子序列、MA区段、翻译终止密码子、RNA稳定化片段及转录终止信号，其中所述DNA启动子序列候选物所处的位置应使其能够驱动所述TAG序列转录。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述RNA稳定化片段来自α-珠蛋白基因。

14.根据权利要求12所述的方法，其中所述转录终止信号是多腺苷酸化信号。

15.根据权利要求12所述的方法，其中所述RNA聚合酶启动子序列是T7启动子序列。

16.根据权利要求12所述的方法，其中所述DNA重组序列选自attP1及attP2。

17.根据权利要求12所述的方法，其中所述TAG序列位于所述启动子序列的3’端及转录终止位点的5’端。

18.一种载体，其中插入DNA启动子序列候选物，所述载体包含TAG序列、一个或多个多克隆位点、至少一种DNA重组序列、阴性选择标记、RNA聚合酶启动子序列、MA区段、翻译终止密码子、RNA稳定化片段及转录终止信号，且其中所述DNA启动子序列候选物所处的位置应使其能够驱动所述TAG序列转录。

19.根据权利要求18所述的载体，其中所述载体是质粒。

20.根据权利要求18所述的载体，其中所述TAG序列为约16个碱基对至约200个碱基对。

21.根据权利要求18所述的载体，其中所述TAG序列位于所述插入的启动子序列的3’端及转录终止信号的5’端。

22.根据权利要求18所述的载体，其中所述RNA稳定化片段来自α-珠蛋白基因。