[发明专利]非常小的胚胎样(VSEL)干细胞的应用和分离

权利要求书

1.一种从受试者中收集自体同源VSEL的方法，包括以下步骤：

给予受试者干细胞增强剂；

从受试者的外周血收集至少10¹⁰个总有核细胞；

使总有核细胞富集为CD34⁺/lin^-/CD45^-或Sca-1⁺/lin^-/CD45^-非常小的胚胎样干细胞(VSEL)；

保存收集的细胞以保持细胞的细胞完整性。

2.根据权利要求1所述的方法，包括从受试者的外周血收集至少10¹¹个总有核细胞。

3.根据权利要求1所述的方法，包括从受试者的外周血收集至少10¹²个总有核细胞。

4.根据权利要求1至3任一项所述的方法，其中富集过程包括基于总有核细胞的细胞标记物表达模式、细胞大小或其组合将总有核细胞进行分类。

5.根据权利要求1至3任一项所述的方法，其中富集过程使用多参数方法。

6.根据权利要求1至5任一项所述的方法，其中干细胞增强剂是G-CSF、GM-CSF、地塞米松、CXCR4受体抑制剂或其组合。

7.根据权利要求6所述的方法，其中干细胞增强剂是G-CSF。

8.根据权利要求7所述的方法，其中给予受试者至少两剂大约1μg/kg/天至8μg/kg/天的G-CSF。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其中皮下给予G-CSF。

10.根据权利要求7所述的方法，其中皮下给予受试者大约每剂480μg的G-CSF。

11.根据权利要求8至10任一项所述的方法，其中在连续两天给予至少两剂G-CSF，受试者每天接受一剂。

12.根据权利要求8至11任一项所述的方法，其中在2至6天的时间内给予受试者至少两剂G-CSF。

13.根据权利要求8至11任一项所述的方法，其中受试者在连续的天数内接受所给予的两剂G-CSF。

14.根据权利要求8至10任一项所述的方法，其中大约每12小时至大约每36小时给予受试者至少两剂G-CSF。

15.根据权利要求1至14任一项所述的方法，还包括在收集的时候将收集的细胞打上标记以用于所述受试者的使用。

16.根据权利要求6所述的方法，其中以大约4至大约6μg/kg/天的剂量或其等同剂量给予受试者G-CSF。

17.根据权利要求6所述的方法，其中皮下给予受试者每剂大约50μg至大约800μg的G-CSF。

18.根据权利要求6所述的方法，其中皮下给予受试者每剂大约300μg至大约500μg的G-CSF。

19.根据权利要求1至18任一项所述的方法，其中使用分离性输血方法从受试者的外周血收集至少10¹⁰个总有核细胞。

20.根据权利要求19所述的方法，其中在给予第二剂G-CSF后的那一天使用分离性输血方法从外周血收集VESL。

21.根据权利要求19所述的方法，其中在给予第二剂G-CSF后大约12至大约36小时使用分离性输血方法从外周血收集VESL。

22.根据权利要求1至21任一项所述的方法，其中受试者是人类受试者，其满足选自以下的至少一个条件：体重为10至200kg，年龄为2至80岁。

23.根据权利要求22所述的方法，其中当受试者为成人或非新生儿的时候进行收集步骤。

24.一种细胞治疗产品，其包含CD34⁺/lin^-/CD45^-或Sca-1⁺/lin^-/CD45^-非常小的胚胎样干细胞(VSEL)和非VSEL的自体同源混合物，其中非VSEL包含祖细胞和任选的功能细胞。