[发明专利]呼肠弧病毒家族病毒的疫苗病毒株的制造方法

权利要求书

1.制备作为呼肠孤病毒科家族成员的蓝舌病毒(BTV)的疫苗病毒株的方法，所述方法包括：

向BTV病毒中引入突变，以使VP6必需基因的功能被破坏；

使用得自病毒基因组并含有所述VP6突变的病毒单链RNA转染细胞；和

使用表达VP6蛋白的辅助细胞培养该转染的细胞以导致疫苗病毒株的产生，

其中所述辅助细胞补充该必需病毒VP6基因的功能，从而使得所述疫苗病毒株在细胞中复制以及进一步其中转染细胞包括2个或更多转染步骤，其中：

(1)第一转染步骤包括使用ssRNA转染细胞，所述ssRNA编码病毒衣壳内层的组装所需的组分；以及

(2)第二转染步骤包括使用ssRNA转染细胞，所述ssRNA为病毒基因组的转录产物及包含突变，并编码病毒组装所需的所有组分。

2.如权利要求1所述的方法，其中在第一及第二转染步骤之间有至少6小时的时间间隔。

3.根据权利要求1所述的方法，其中部分ssRNA是含有所述突变的病毒基因组cDNA克隆的转录产物。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所有ssRNA为含有所述突变的病毒基因组cDNA克隆的转录产物。

5.根据权利要求1所述的方法，其中多于一个必需基因的功能被破坏。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞适于被ssRNA转染及用于培养病毒株，并且选自BHK 21细胞、Vero细胞、293T细胞、BSR细胞、HeLa细胞、C6/36细胞和KC细胞。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述用于转染细胞的病毒ssRNA是分离的ssRNA。

8.根据权利要求1所述的方法，其还包括从细胞分离疫苗病毒株。