[发明专利]具有内切葡聚糖酶活性的多肽和编码所述多肽的多核苷酸

权利要求书

1.一种具有内切葡聚糖酶活性的分离的多肽，其选自下组：

(a)多肽，其包含与SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4的成熟多肽具有至少60％同一性的氨基酸序列；

(b)由如下多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸在至少中等严紧条件下与以下杂交：(i)SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3的成熟多肽编码序列，(ii)包含SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3的成熟多肽编码序列的基因组DNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全长互补链；

(c)由如下多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸包含与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3的成熟多肽编码序列具有至少60％同一性的核苷酸序列；和

(d)SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4的成熟多肽的包含取代、缺失和/或插入一个或多个(几个)氨基酸的变体。

2.权利要求1的多肽，其包含SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4的氨基酸序列或其具有内切葡聚糖酶活性的片段，或由SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4的氨基酸序列或其具有内切葡聚糖酶活性的片段组成。

3.权利要求1的多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸包含SEQ IDNO：1或SEQ ID NO：3的核苷酸序列或其编码具有内切葡聚糖酶活性的片段的亚序列，或由SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3的核苷酸序列或其编码具有内切葡聚糖酶活性的片段的亚序列组成。

4.权利要求1的多肽，其由多核苷酸编码，所述多核苷酸包含于质粒pTter16A或质粒pTter16B中，所述质粒pTter16A包含于大肠杆菌NRRLB-50081中，所述质粒pTter16B包含于大肠杆菌NRRL B-50082中。

5.分离的多核苷酸，其包含编码权利要求1-4任一所述的多肽的核苷酸序列。

6.核酸构建体，其包含权利要求5的多核苷酸，所述多核苷酸可操作连接于一个或多个(数个)调控序列，其在表达宿主中引导该多肽的产生。

7.重组宿主细胞，其包含权利要求6的核酸构建体。

8.产生权利要求1-4任一所述多肽的方法，包括：(a)在有益于该多肽产生的条件下培养细胞，其以其野生型形式产生该多肽；和(b)回收所得多肽。

9.产生权利要求1-4任一所述多肽的方法，包括：(a)在有益于该多肽产生的条件下培养包含核酸构建体的宿主细胞，所述核酸构建体包含编码该多肽的核苷酸序列；和(b)回收所得多肽。

10.产生亲本细胞突变体的方法，包括破坏或缺失编码权利要求1-4任一所述多肽的核苷酸序列，其导致所述突变体与所述亲本细胞相比产生较少的该多肽。

11.产生权利要求1-4任一所述多肽的方法，包括：(a)在有益于产生所述多肽的条件下培养包含编码所述多肽的多核苷酸的转基因植物或植物细胞；和(b)回收所述多肽。

12.转基因植物、植物部分或植物细胞，其用编码权利要求1-4任一所述的多肽的多核苷酸转化。

13.双链抑制性RNA(dsRNA)分子，其包含权利要求5的多核苷酸的亚序列，其中所述dsRNA可选地为siRNA或miRNA分子。

14.在细胞中抑制具有内切葡聚糖酶活性的多肽表达的方法，其包括对所述细胞施用或在细胞中表达双链RNA(dsRNA)分子，其中所述dsRNA包含权利要求5的多核苷酸的亚序列。

15.核酸构建体，其包含编码蛋白质的基因，所述基因可操作连接于编码信号肽的核苷酸序列，所述信号肽包含SEQ ID NO：2的氨基酸1到20或SEQ ID NO：4的氨基酸1到18，或由SEQ ID NO：2的氨基酸1到20或SEQID NO：4的氨基酸1到18组成，其中所述基因对所述核苷酸序列为外源的。

16.重组宿主细胞，其包含权利要求15的核酸构建体。

17.产生蛋白质的方法，包括：(a)在有益于产生所述蛋白质的条件下培养权利要求16所述的重组宿主细胞；和(b)回收所述蛋白质。