[发明专利]具有杀虫活性的蛋白

说明书

联邦政府资助

美国政府在这个发明缴足执照，在有限的情况下有权要求专利权人许可他人以合理的条件所规定的07-的RD-L的美国部门颁发的条款为1242300-041农业部林务局北方研究站。

技术领域

本申请涉及一般控制有害有机体，更具体地说，组成成分和方法，控制方法和白蜡窄吉丁(“EAB的”)，Agrilus曲柳窄吉丁。

背景技术

苏云金杆菌(“Bt基因”)是一个孢子形成，杆状，革兰氏阳性菌密切相关，蜡样芽胞杆菌。大量的Bt基因已被发现并分离到亚种，分组，如苏云金芽孢杆菌苏云金杆菌，苏云金芽孢杆菌kurstaki，苏云金芽孢杆菌aizawai的基础上，分类计划最初由博纳富瓦，并在1963年开发德巴尔雅克等。转Bt显然是从其他杆菌区别在于细胞内晶体s，这是不溶性的蛋白生产中的存款，其中许多人对各种昆虫物种的杀虫活性。在芽孢形成过程中，综合了大量转Bt一个或几个蛋白S的然后晶体利泽成各种形状的。

转Bt基因为基础的昆虫icides制定与孢子S和转Bt发酵过程中产生的材料，但主要的活性成分S是这些昆虫icidal蛋白晶体S作为第已知哭毒素哭了一个天然毒素毒性后，两者均致命剂量摄入通路涉及的易感主机1)由适当的pH值在中肠晶体毒素原增溶作用的结果；2)酶切割的毒素原分子在特定地点的活化形式的结果该毒素；3)活化毒素分子受体结合具体的刷状缘膜，导致肠上皮细胞裂解；4)不可弥补的损害编队在肠道中肠细菌进入血腔造成的；及5)死亡败血症(Knowles和埃拉尔1992年，鲍尔和潘克拉茨1992年)。

该基因编码的转Bt晶体蛋白被称为“哭，因为它的晶体-表型的生产”。第一次哭基因，后来被指定哭生长素，克隆约由施奈夫和怀特利(1981年，国立。Natl。ACAD的。科技。美国78个，2893年至2897年)20年前。从那时起，额外的cry基因的克隆许多报告已经出版。

即使在一转Bt生产菌株的晶体蛋白在昆虫s品种特性不同。大多数转Bt晶体生产线昆虫icidal蛋白的角度衡量，鳞翅目物种活跃。此外，还有转Bt菌株产生晶体线昆虫icidal蛋白活火山对双翅目和鞘翅目昆虫物种。

截至1997年，约190Bt基因为基础的微生物昆虫icides登记在美国的某些鳞翅目，双翅目控制和鞘翅目害虫(施奈夫等。1993年)。由于蛋白秒，转Bt的哭声基因用于赋予昆虫抗性植物和微生物秒使用基因工程

在转Bt晶体蛋白，Cry3，Cry7，Cry8，Cry9和Cry43已知的对鞘翅目物种活跃。其中，Cry8Ca报道，对付圣甲虫甲虫活跃(大场等。，1992年，j的耳目一新。微生物。14，54-57)。在2003年，浅野等人。(2003年，生物防治28(2003)，191-196)公布了一个新的转Bt菌株称为SDS502这显示了对鲳cuprea，甲侧柏，和非常高的水平弧丽金龟活动调查粳稻，这是圣甲虫甲虫物种。体育粳稻，日本甲虫，是在美国特别重要的基因高山口SDS502粳稻活动负责已被隔离并命名cry8Da。该基因编码的蛋白，Cry8Da，发现有一高，对日本甲虫的具体活动，至少高一倍作为Cry8Ca和Cry43Aa，另外两个转Bt晶体蛋白S与具体活动对日本甲虫和其他金龟子杀虫活性。进一步资料SDS502，Cry8Da，并Cry8Da可能会发现在美国专利号6962977′，发出2005年11月8日，这是此纳入参考的全部。

在昆虫害虫的，任何已知的杀虫活性哭了先前发现，白蜡窄吉丁(EAB的)，花曲柳窄吉丁(鞘翅目：吉丁科)，可能是其中最具破坏性的。在白蜡窄吉丁是蛀木虫，原产于中国，日本，韩国，蒙古，俄罗斯远东地区，以及台湾(于1992年)。

成虫从树上开始出现在5月底，在6月的高峰出现。在白蜡树叶完全刷新了这个时候。EAB的成虫比较长寿命(在实验室2个月)和灰树木的树叶在其整个生命。他们的日子大多是在花的檐篷，并要求饲养3周前的成熟开始产卵。有一些交错出现，因为EAB的发展在一或两年，这取决于对虫害的下降阶段，由于灰卫生：早在侵扰他们需要2年时间攻击分行上层林冠削弱树。一旦冠下降是广泛的，他们攻击的主要干道和发展，是在一年内完成。

2002年，被确定为EAB的广泛灰(白蜡属的原因。)在密歇根州和东南部附近的安大略省，加拿大死亡率。EAB的已造成约自其在北美(抵达Cappaert等2500万下密歇根州白蜡树。2005年，波兰和麦卡洛2006年)。EAB的也蔓延到美国密歇根州上半岛，俄亥俄，印第安纳州，马里兰州，弗吉尼亚州和伊利诺伊州。