[发明专利]微生物捕获用组合物和方法

说明书

相关专利申请的交叉引用

本发明要求2007年12月31日提交的美国临时申请序列号61/018011的优先权，该临时申请以引用方式并入本文。

政府权利

按照美国国防部核准的第DAAD-13-03-C-0047号(项目编号2640)和第W81XWH-07-01-0354号(项目编号2750)合同的条款，美国政府可拥有本发明的某些权利。

背景技术

用于确定多种样品(包括食品样品、临床样品、环境样品和实验样品在内)中微生物的存在的测定法越来越重要。这类测定法可指示微生物负荷和/或鉴定所存在的微生物。

现有的定性和定量确定微生物的存在的技术通常涉及鉴定特定的微生物，如病原菌。样品中具体微生物(如细菌)的存在的成功检测依赖于样品中的细菌浓度。通常，将细菌样品进行培养，目的是评估存活力和增加样品中的细菌数目以确保有足够的水平供检测。培养步骤需要很多时间，这会延迟获得检测结果。

通过浓缩样品中的细菌，可用较短的培养步骤或者甚至不用培养步骤就可进行检测。已开发出通过使用特定细菌菌株的特异性抗体来分离从而浓缩该菌株的方法。

已提出了其他的非菌株特异性的浓缩方法，这种方法将使得可以对所存在的微生物进行更全面的采样。菌株混合物当中的某种特定菌株或某几种特定菌株一旦得到分离，可用已知的检测方法(包括例如核酸扩增方法)来进行鉴定和/或定量。

已提出了用碳水化合物和凝集素蛋白的相互作用来非特异性分离微生物。存在于细菌表面上的凝集素被提出作为连接到聚丙烯酰胺的某些碳水化合物的捕获靶标。充当微生物营养物的物质也已被提出用作配体以供非特异性捕获微生物。这种营养物配体包括碳水化合物、维生素、铁螯合化合物和铁载体(sidorophore)。支撑物支持的壳聚糖也已被提出用于以非菌株特异性方式浓缩微生物，使得可以更容易和更快速地测定微生物。

虽然一些微生物分离方法已得到了描述，但对于改进的用于分离微生物的材料和方法仍继续存在着兴趣和需求。

发明内容

现已发现，生物素结合蛋白通过碳水化合物连接到固相支撑物，这样所得的组合对于非特异性结合细菌细胞是有效的。固相支撑物上有碳水化合物但没有生物素结合蛋白，这样所得的组合物被发现对于非特异性结合细菌细胞不太有效。此外，固相支撑物上有生物素结合蛋白但没有碳水化合物，这样所得的组合物也被发现对于非特异性结合细菌细胞不太有效。在一些实施例中，通过碳水化合物连接到固相支撑物的生物素结合蛋白，在甾族化合物或三萜烯的两亲性糖苷存在下，对于非特异性结合细菌细胞更加有效。

因此，本发明提供用于非特异性结合细菌细胞的新组合物。

在一个实施例中，提供包含以下组分的组合物：固相支撑物，该固相支撑物具有包含碳水化合物和生物素结合蛋白的组合的表面，其中该蛋白与该碳水化合物共价键合，且其中该蛋白通过该碳水化合物与该固相支撑物连接；以及1)多个非特异性结合于该碳水化合物和该蛋白的组合的细菌细胞或者2)甾族化合物或三萜烯的两亲性糖苷中的至少一者。

在另一个实施例中，提供包含以下组分的组合物：

固相支撑物，该固相支撑物具有包含碳水化合物和生物素结合蛋白的组合的表面，其中该蛋白与该碳水化合物共价键合，且其中该蛋白通过该碳水化合物与该固相支撑物连接；以及

多个非特异性结合于该碳水化合物和该蛋白的组合的细菌细胞。

在另一个实施例中，提供包含以下组分的组合物：

固相支撑物，该固相支撑物具有包含碳水化合物和生物素结合蛋白的组合的表面，其中该蛋白与该碳水化合物共价键合，且其中该蛋白通过该碳水化合物与该固相支撑物连接；以及

甾族化合物或三萜烯的两亲性糖苷。

在另一个方面，提供分离细菌细胞的方法，所述方法包括：

提供固相支撑物，该固相支撑物具有包含碳水化合物和生物素结合蛋白的组合的表面，其中该蛋白与该碳水化合物共价键合，且其中该蛋白通过该碳水化合物与该固相支撑物连接；

提供怀疑具有多个细菌细胞的样品；

使具有包含该碳水化合物和该生物素结合蛋白的组合的表面的该固相支撑物与该样品接触；其中来自该样品的多个细菌细胞中的至少一部分非特异性结合于该固相支撑物的表面；以及

在来自该样品的多个细菌细胞中的该至少一部分非特异性结合于该固相支撑物的表面后，使该固相支撑物与该样品的其余部分分离。

在另一个方面，提供用于检测细菌细胞的装置，该装置包括：

一种组合物，该组合物包含：