[发明专利]乳液中交联的透明质酸

说明书

发明领域

本发明涉及用于产生交联的透明质酸微珠的过程，以及产生的微珠，所述方法包括步骤：

(a)将包含透明质酸或其盐的含水碱溶液与包含交联剂的溶液混合；

(b)在有机或油相中由步骤(a)的混合溶液形成具有期望大小的微滴，以形成有机包水或油包水(W/O)乳液；

(c)连续搅拌W/O乳液，由此进行透明质酸与二乙烯砜的反应以提供交联的透明质酸微珠；和

(d)纯化交联的透明质酸微珠。

发明背景

本发明涉及用于制备修饰的透明质酸(HA)的方法，特别是乳液中交联的HA，其用于生物医学和药物应用中。

透明质酸(HA)是天然的直链糖类聚合物，其属于非硫酸化的(non-sulfated)糖胺聚糖类。它由β-1，3-N-乙酰葡糖胺和β-1，4-葡糖醛酸的重复二糖单元组成，具有多至6MDa的分子量(MW)。HA存在于透明软骨、滑膜关节液(synovialjoint fluid)和真皮和表皮皮肤组织中。可以从天然组织包括脊椎动物的结缔组织，从人脐带和从鸡冠(cocks’comb)中提取HA。然而，现今优选的是通过微生物方法制备透明质酸以使转移传染剂的潜在风险最小化，并且增加产物均匀性、品质和可用性(WO 03/0175902，Novozymes)。

已经鉴定了HA在体内的多种功能。它在生物体中作为对许多组织(例如皮肤、腱、肌肉和软骨)的细胞的机械支持而发挥重要作用。HA参与了关键的生物学过程，例如组织的湿润，和润滑。它还疑似在许多生理功能中具有作用，例如粘附、发育、细胞运动性、癌、血管发生和愈伤。由于HA独特的物理和生物学性质(包括粘弹性、生物相容性、生物可降解性)，将HA广泛应用在眼科学、风湿病学、药物递送、愈伤以及组织工程中现有的和正在发展的应用中。在这些应用中的一些中HA的使用受到下述事实的限制，即在室温也就是大约20℃HA溶于水，在体内其被透明质酸酶迅速降解，和难以将其加工成生物材料。因此引入了HA的交联，从而改进HA的物理和机械性质及其体内停留时间。

美国专利No.4,582,865(Biomatrix Inc.)描述了HA的交联凝胶的制备，其单独或与其它亲水聚合物混合，使用二乙烯砜(DVS)为交联剂。EP 0 161 887B1中公开了使用多官能环氧化合物制备交联HA或其盐。已经用于通过共价键交联HA的其它二-或多-官能试剂包括甲醛(美国4,713,448，Biomatrix Inc.)、聚吖丙啶(WO 03/089476 A1，Genzyme Corp.)、L-氨基酸或L-氨基酯(WO2004/067575，Biosphere S.P.A.)。已经报道碳化二亚胺用于HA的交联(美国5,017,227，Genzyme Corp.；美国6,013,679，Anika Research，Inc)。美国4,957,744中公开了HA与脂肪醇的全部或部分交联的酯，和这些部分酯与无机或有机碱的盐。美国2006/0040892(University ofNorth Texas)中公开了在水/丙酮混合物中HA链与1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(“EDAC”)和己二酸二酰阱的交联。WO 2006/56204(Novozymes A/S)还公开了使用二乙基砜(DVS)作为交联剂制备HA的交联凝胶的方法。

WO 2008/100044发表于本申请的优先权年份，并且描述了通过交联透明质酸而制备透明质酸水凝胶纳米颗粒的方法，该方法包括混合i)包含溶于其中的表面活性剂的油相和ii)水相，其中包含透明质酸和溶于含水碱溶液的水溶性交联剂，其中未提及二乙烯砜，从而形成w/o乳液，并且交联w/o乳液中的透明质酸，油相包含十二烷、庚烷或鲸蜡基乙基己酸(cetylethylhexanoate)。