[发明专利]重组VWF配方

说明书

本申请要求于2007年12月28日提交的美国临时申请No.61/017,418、以及于2007年12月31日提交的美国临时申请No.61/017,881的优先权，在此将其全部内容并入本文以作为参考。

技术领域

本发明一般涉及重组VWF的配方和制备包含重组VWF的组合物的方法。

背景技术

冯维勒布兰特因子(VWF)被是在血浆中循环的糖蛋白，是一系列大小在约500至20,000kD范围内的多聚体。多聚体形式的VWF由通过二硫键连接在一起的250kD的多肽亚基组成。VWF介导原始血小板粘附至受损血管壁的内皮下。仅较大的多聚体显示出止血活性。根据假设，内皮细胞分泌大聚合体形式的VWF，并且那些具有低分子量的VWF形式(低分子量VWF)由蛋白水解切割而产生。具有大分子质量的多聚体储藏在内皮细胞的怀布尔-帕拉德(Weibel-Pallade)体中，并且一旦受到刺激就被释放出来。

VWF是作为基本上由重复的结构域组成的预前体VWF(prepro-VWF)由内皮细胞和巨核细胞合成的。一旦切割信号肽，前VWF就通过位于C-末端区域的二硫键发生二聚化。该二聚体用作为用于多聚化的原聚体，这取决于在自由端末端之间的二硫键。组装成多聚体之后，蛋白水解除去前体肽序列(Leyte et al.，Biochem.J.274(1991)，257-261)。

由克隆的VWF cDNA预测的最初翻译产物是2813个残基的前体多肽(预前体VWF)。预前体VWF由一个有22个氨基酸的信号肽和一个有741个氨基酸的前体肽组成，成熟VWF包含2050个氨基酸(Ruggeri Z.A.和Ware，J.，FASEB J.，308-316(1993))。

在VWF中的缺失与冯维勒布兰特疾病(VWD)有因果关系，其特征为或多或少呈现出血表现型。3型VWD是最严重的形式，其中VWF完全消失；而1型VWD涉及VWF的定量丢失，并且其表现型能够非常温和。2型VWD涉及VWF的定性缺失，并且能够像3型VWD一样严重。2型VWD具有许多子形式，一些子形式与高分子量多聚体的丧失或降低有关。2a型冯维勒布兰特综合症(VWS-2A)的特征为中等和大的多聚体的同时丢失。VWS-2B的特征为最大分子量的多聚体的丢失。与VWF有关的其他疾病和紊乱在本技术领域是已知的。

美国专利No.6,531,577、7,166,709，以及欧洲专利申请No.04380188.5描述了源于血浆的VWF配方。然而，除源于血浆的VWF数量和纯度结果之外，还存在血液携带的病原体(例如，病毒和变异性克罗伊茨费尔特-雅各布病(vCJD)的风险。

因此，存在开发稳定的包含重组VWF的药物配方的需要。

发明内容

本发明提供了对包含重组VWF的组合物有用的配方，可得到高度稳定的药物组合物。稳定的药物组合物可用作治疗剂，用于遭受能够受益于给药重组VWF的紊乱或状况的个体的治疗。

在一种实施方式中，本发明提供了一种重组冯维勒布兰特因子(rVWF)的稳定液态药物配方，其包含：(a)rVWF；(b)缓冲剂；(c)一种以上盐；(d)可任选的稳定剂；以及(e)可任选的表面活性剂；其中，rVWF包含选自下组的多肽：a)SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列；b)a)的生物学活性类似物、片段或变体；c)被SEQ ID NO：1所示的多核苷酸编码的多肽；d)c)的生物学活性类似物、片段或变体；以及e)被一种多聚核苷酸所编码的多肽，所述多聚核苷酸可在适度严格的杂交条件下杂交至SEQ ID NO：1所示多聚核苷酸上；其中缓冲液由在约0.1mM至约500mM范围内、并且其中pH在约2.0至约12.0范围内的pH缓冲剂组成；其中盐的浓度为约1至500mM；其中稳定剂的浓度为约0.1至1000mM；并且其中表面活性剂的浓度为约0.01g/L至0.5g/L。

在另一个实施方式中，提供的上述配方中，rVWF包含SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。在另一个实施方式中，提供的上述配方中缓冲剂选自由柠檬酸钠、甘氨酸、组氨酸、Tris和这些试剂的组合物所构成的组。在又一个实施方式中，提供的上述配方中，缓冲剂是柠檬酸盐。在本发明的再一个实施方式中，提供的上述配方中，pH在6.0-8.0、或6.5-7.3的范围内。在相关实施方式中，提供的上述配方中，pH是7.0。在另一个实施方式中，提供的上述配方中，缓冲剂是柠檬酸盐并且pH是7.0。