[发明专利]使用含有植物源性组分的培养基和挠性密闭容器来制备肉毒梭菌毒素的方法

权利要求书

1.一种制备肉毒梭菌毒素的方法，所述方法包含：

(a)在含有植物源性组分的培养基中培养肉毒梭菌以于细胞外部表达肉毒梭菌毒素；以及

(b)从所获得的培养物移除所述细胞而获得包括表达于所述细胞外部的肉毒梭菌毒素的部分并从所述部分中分离出所述肉毒梭菌毒素。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述含有植物源性组分的培养基是选自由以下组成的群组中的一个：包含葡萄糖、酵母提取物和植物蛋白胨的培养基；包含葡萄糖、酵母提取物、植物蛋白胨和植物胰胨的培养基；包含葡萄糖、酵母提取物、植物蛋白胨和大豆胨的培养基；包含葡萄糖、酵母提取物、大豆胨和植物胰胨的培养基；包含葡萄糖、酵母提取物、硫代乙醇酸钠、植物蛋白胨、植物胰胨和大豆胨的培养基；以及包含葡萄糖、酵母提取物、植物蛋白胨、植物胰胨和大豆胨的培养基。

3.如权利要求2所述的方法，其中以所述培养基总重量计，葡萄糖、酵母提取物、硫代乙醇酸钠、植物蛋白胨、植物胰胨和大豆胨在各培养基中的量分别为0.2重量％到2重量％、0.5重量％到3重量％、0.05重量％到2重量％、0.5重量％到2重量％、0.5重量％到2重量％、以及0.5重量％到2重量％。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述肉毒梭菌毒素是选自由以下组成的群组中的一个：肉毒毒素A、肉毒毒素B、肉毒毒素C、肉毒毒素D、肉毒毒素E、肉毒毒素F和肉毒毒素G。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述操作(a)的培养是通过以下步骤来进行：将培养基引入包含入口和出口并由挠性材料构成的密闭容器中，给所述培养基接种肉毒梭菌，并培养所述细胞。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述密闭容器被预先灭菌并呈袋形式。

7.如权利要求5所述的方法，其中所述密闭容器是利用摇动来搅拌。

8.如权利要求5所述的方法，其中所述密闭容器为气密性的。

9.如权利要求5所述的方法，其中所述培养是在没有为了维持厌氧条件而供给氮气、使用具有除氧活性的化学材料或调节pH值的情况下进行。

10.如权利要求1所述的方法，其中操作(b)包含：

(b-1)从所述培养物中移除所述细胞，将酸添加到所获得的培养物中以使肉毒梭菌毒素沉淀析出，并接着分离出沉淀物；

(b-2)将所分离的沉淀物溶解于液体介质中并超滤所得溶液；以及

(b-3)对已被超滤的溶液进行阴离子交换色谱分离。

11.如权利要求10所述的方法，其中在操作(b-1)中，所述细胞的所述移除是使用至少一种选自由深层过滤和微量过滤组成的群组的方法来进行，并且所述毒素的所述沉淀是通过将酸添加到所获得的培养物中以将所述培养物的pH值维持在3到4范围内来进行，而且在操作(b-2)中，所述超滤是使用截留分子量为100kDa或以下的膜来进行。

12.如权利要求1所述的方法，其中操作(a)和(b)中的至少一个操作是使用已预先灭菌的一次性容器来进行，并且在每一操作中，以不与所述容器的外部连通的方式转移样品。

13.一种制备肉毒梭菌毒素的方法，所述方法包含：

(a)将培养基引入包含入口和出口并由挠性材料构成的密闭容器中，给所述培养基接种肉毒梭菌，并培养细胞以在培养物中表达肉毒梭菌毒素；以及

(b)从所获得的培养物中分离出肉毒梭菌毒素。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述密闭容器被预先灭菌并呈袋形式。

15.如权利要求13所述的方法，其中所述密闭容器是利用摇动来搅拌。

16.如权利要求13所述的方法，其中所述密闭容器为气密性的。

17.如权利要求13所述的方法，其中所述培养是在没有为了维持厌氧条件而供给氮气、使用具有除氧活性的化学材料或调节pH值的情况下进行。