[发明专利]人巨细胞病毒中和抗体及其用途

说明书

所有引用的文件均通过引用方式完整地结合在本文中。 

技术领域

本发明涉及具有中和人巨细胞病毒(hCMV)的高效力(potency)且特异性针对hCMV蛋白UL128、UL130和UL131A的组合的抗体，以及产生该单克隆抗体的永生化B细胞。本发明还涉及通过hCMV蛋白UL128、UL130和UL131A的组合确定的、该抗体所结合的表面抗原，以及该抗体和表位在筛选方法以及疾病的诊断、预防和治疗中的用途。

背景技术

人巨细胞病毒(hCMV)是一种广泛分布的病原体，其可在免疫抑制的成人中和胎儿感染后导致严重的病理，并参与例如动脉粥样硬化的慢性疾病。hCMV感染多种细胞类型，包括成纤维细胞、内皮细胞、上皮细胞和造血细胞[1]。正在被开发作为候选疫苗的体外繁殖的hCMV减毒菌株已经丧失了内皮细胞的向性(tropism)，但是仍然保留感染成纤维细胞的能力[2]。hCMV的细胞向性被认为是由两种病毒糖蛋白复合物调控的。例如gH、gL和gO的糖蛋白的复合物似乎是感染成纤维细胞所需要的，而gH、gL和由UL131-UL128基因编码的蛋白质的复合物参与内皮细胞、上皮细胞和树突细胞的感染[2-8]。

超免疫球蛋白已被商业化用于预防移植相关的hCMV疾病，并且最近的证据表明它们对孕妇有治疗效果[9]。该治疗方法受限于可被递送的中和抗体的量低，因而非常需要获得具有高中和能力的人抗体(如人单克隆抗体)。然而，hCMV中和抗体的靶点仍尚待确 定。尽管一些针对gH、gB以及UL128和UL130基因产物的抗体在体外表明具有中和活性[7，10，11]，且针对gH的抗体已经在临床试验中进行了评估(由于缺乏治疗效果被终止了)，但分离的单克隆抗体的中和效力至今仍一般，因为在抗体浓度范围是0.5-20mg/ml时才可以观察到中和作用。此外，目前的方法通常使用成纤维细胞作为目标细胞来测定抗-hCMV抗体的中和效力。然而，已知hCMV通过感染其他细胞类型(例如内皮细胞、上皮细胞以及白细胞)也能引起病理。已知的针对UL 128和UL 130的抗体显示在中和内皮细胞感染中的效力很低[7]，且看起来不存在可用的能够以高效力中和目标非成纤维细胞的感染的单克隆抗体。

因此，需要能够以高价中和目标非成纤维细胞的hCMV感染的抗体，以及阐明该抗体结合的靶点。

发明概述

本发明部分是基于能够以高效力中和hCMV感染的新抗体以及本发明的这些抗体所结合的新表位的发现。因此，在一个实施方式中，本发明包括具有中和hCMV的高效力的中和抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段特异性针对hCMV蛋白UL128、UL130和UL131A的组合。

在另一个实施方式中，本发明包括编码本发明抗体或抗体片段的核酸分子。

在再一个实施方式中，本发明包括含有编码本发明抗体或抗体片段的核酸分子的载体。

在另一个实施方式中，本发明包括含有包含本发明核酸分子的载体的细胞。

在另一个实施方式中，本发明包括表达具有中和hCMV的高效力的抗体的永生化B细胞克隆，其中所述抗体特异性针对hCMV蛋白UL128、UL130和UL131A的组合。

在再一个实施方式中，本发明包括与本发明的抗体相结合的表 位。

在进一步的实施方式中，本发明包括包含与本发明的抗体相结合的表位的免疫原性多肽。

在另一个实施方式中，本发明包括与结合本发明的抗体的表位相结合的配体。

在进一步的实施方式中，本发明包括用于制备具有中和hCMV的高效力的抗体的方法，其中所述的抗体特异性针对hCMV蛋白UL128、UL130和UL131A的组合。该方法包括(i)培养表达本发明抗体的永生化B细胞克隆和(ii)从B细胞分离抗体。

在另一个实施方式中，本发明包括一种包含本发明抗体或抗体片段、本发明的核酸、表达本发明抗体的永生化B细胞克隆，或包含与本发明的抗体或抗体片段相结合的表位的免疫原性多肽的药物组合物。