[发明专利]自身活化淋巴细胞培养用培养基组合物

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于恶性肿瘤治疗的培养自身活化淋巴细胞的培养基组合物。更具体地说，本发明涉及一种培养基组合物，所述培养基内除了含有白细胞介素2(IL-2)以外还含有抗CD3、抗CD16以及抗CD56抗体，可以均匀地增值和活化NK细胞、T细胞和NKT细胞，从而可以培养在多种多样的恶性肿瘤治疗中具有显著功能的免疫细胞。

背景技术

最近在癌治疗中，可以替代现有的手术、放射治疗以及化学疗法的所谓过继免疫疗法(adaptive immunotherapy)的新疗法正引起人们的注目。

过继免疫疗法是一种将从患者的血液中分离而获得自然杀伤细胞(natural killer cell；NK细胞)、树突状细胞(De)、B细胞、T细胞等在治癌过程中最重要的免疫细胞，利用多种刺激剂，扩增出具有高度抗肿瘤活性的免疫细胞，并回输患者体内的方法，该方法由于使用患者自己的血液，与传统的化学疗法等治疗方法相比副作用少、给药简便，因此，最近被广泛研究。

在过继免疫疗法中进行活化的免疫细胞当中，特别是属于淋巴细胞一种的NK细胞具有可以有效地杀伤感染病毒和肿瘤细胞、但不杀伤大部分正常细胞的特征。众所周知，这种NK细胞在初期机体防御机构和人体的肿瘤免疫中起重要的作用。即，即使无由MHC(MajorHistocompatibility Complex)表达而获得的免疫过程，NK细胞也可以杀伤特异性自身细胞、同种细胞以及异种癌细胞，特别是优先杀伤很少表达或不表达Class 1 MHC的靶细胞。为此，NK细胞不仅可以有效的杀伤不表达MHC的大部分癌细胞，还可以杀伤某些病毒感染细胞和如伤寒沙门菌(salmonella typhi)等细菌。

但是，这种具有高度杀伤癌细胞功能的NK细胞只占正常外周血淋巴细胞的5％～15％，特别是在癌患者的情况下，该比例下降到不足1％，因此，如果没有通过过继免疫疗法的另外扩增过程，就无法有效地攻击癌细胞。

因此，为了适用于以癌治疗为目的的过继免疫疗法，需要进行针对癌进展程度大量培养和活化以NK细胞为首的免疫细胞的培养基的研究，但是，用于培养适用于过继免疫疗法的免疫细胞的现有的培养基主要是针对大量扩增免疫细胞中的T细胞。

韩国专利第0735081号(发明名称：活化CD4T细胞的方法)公开了这种现有的免疫细胞培养用培养基。根据上述的活化CD4 T细胞的方法，从血液等生物试样分离CD4 T细胞之后，在含有GM-CSF、IFN-gamma、TNF-alpha、Lectin以及IL-4等细胞因子的培养基中进行培养，并在试管中活化CD4 T细胞，从而获得预防或治疗细菌感染的组合物。

但是，在上述活化CD4 T细胞的方法中所使用的培养基组合物具有以下技术问题；因为该培养基组合物只能选择性地激活免疫细胞中参与获得免疫的T细胞，所以当使用该方法治疗肿瘤时，虽然通过大量被激活的T细胞可以有效地攻击或杀伤已被记忆的癌细胞，但是在攻击未被记忆的各种癌细胞而治疗恶性肿瘤方面，受到了限制。

发明内容

本发明的目的是解决上述现有技术中存在的问题。即，本发明目的是提供一种培养基组合物，该培养基中除了含有白细胞介素2之外，还含有抗CD3、抗CD16、以及抗CD56抗体，能均匀地增殖和活化NK细胞、T细胞以及NKT(Natural Killer T)细胞，从而可以培养在多种多样的恶性肿瘤治疗中具有显著功能的免疫细胞。

作为为了达到上述目的的技术思想的本发明提供自身活化淋巴细胞培养用培养基组合物，该培养基组合物由细胞培养用培养基和添加于所述细胞培养用培养基的添加剂构成，用于大量培养自身活化淋巴细胞，其特征在于，所述添加剂包含白细胞介素-2、抗CD3抗体、抗CD16抗体以及抗CD56抗体。

根据本发明的自身活化淋巴细胞培养用培养基组合物，可以大量激活对不表达MHC的大部分癌细胞具有较强杀伤活性的NK细胞，适用于副作用少、给药简便的过继免疫疗法，为此，具有极大地改善因各种恶性肿瘤而受痛苦的癌患者的预后的效果。

附图说明

图1为表示根据本发明的培养基组合物培养的结果免疫细胞数变化的示意图。

图2为表示根据本发明的培养基组合物培养的活化淋巴细胞表型变化的示意图。

图3为表示根据本发明的培养基组合物培养的活化淋巴细胞细胞毒性分析结果的示意图。

图4为分别利用本发明的培养基组合物和现有的T细胞培养用培养基组合物进行培养的活化淋巴细胞的癌细胞杀伤能力比较图。