[发明专利]东方伊萨酵母菌株及其制备方法,以及用该菌株制备木糖醇、乙醇的方法

权利要求书

1.一种微生物菌株，其特征在于，所述微生物菌株为东方伊萨酵母Issatchenkia orientalis(S-7)，CCTCC NO：M206098。

2.根据权利要求1所述的微生物菌株，其特征在于，所述微生物菌株的26SrDNA D1/D2区域核苷酸特征序列与GenBank登记号为EF030708的特征序列同源性为100％。

3.一种用于权利要求1或者2所述的微生物菌株的制备方法，其特征在于，所述方法包括下列步骤：

S1.用蔗渣半纤维素水解物为分离培养基的基本成分，适当真空后用碱调节pH 5-6，如果制成平板，外加琼脂20g/L作为固形剂；

S2.从纸浆厂废水污染的环境采集的土壤、淤泥作分离样品，250ml三角瓶装量25ml，接入废水或淤泥分离样品约1g，30℃，200rpm摇瓶富集培养72h；

S3.取有菌体生长的培养液在同一培养基平板上划线分离，选择能够快速生长的类型，转到斜面保存；

S4.斜面培养物转移到半纤维稀酸水解物中并在摇瓶条件下培养24小时，离心除去菌体，然后接入能够同化木糖的酵母菌株进行发酵，选留那些能够有效改善半纤维素稀酸水解物发酵性能的脱毒活性菌株；

S5.按照上述步骤经过十个以上批次的样品分离，获得改善半纤维素水解物发酵性能活性最强的一个分离物S-7；

S6.把按照上述步骤分离得到的菌株S-7于4℃冷藏或用冻干法保藏。

4.一种用于权利要求1或者2所述的微生物菌株的半纤维素水解物生物脱毒种子液制备方法，其特征在于，所述种子液制备方法包括如下步骤：

S1.制备培养基，所述培养基的组成为：葡萄糖50g/L，MgSO₄.7H₂O2g/L，K₂HPO₄ 4g/L，KH₂PO₄ 6g/L，酵母膏5g/L；

S2.将CCTCC NO：M206098的斜面培养物接入液体种子培养基，装液量为摇瓶容量的20％；

S3.在27--30℃，转速200rmp条件下摇床培养12～18小时，获得可用于脱毒的种液。

5.用权利要求1或者2所述的菌株制备木糖醇的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.经过CCTCC NO：M206098发酵脱毒过的半纤维素水解物，真空浓缩至木糖约150g/L，氨水调节至pH＝6，另加入酵母膏5g/L，得到用于木糖醇发酵的半纤维素水解物培养基

S2.木糖醇发酵用摇瓶进行，摇瓶装量10％，按5％(v/v)接种量接入热带假丝酵母(Candida tropicalis)CCTCC NO：M205067种子液，200rmp，33℃进行发酵至木糖消耗完；

S3.收集离心沉淀的菌体，投入到新鲜的半纤维素水解物培养基中继续新一轮的木糖醇发酵，离心上清液制备木糖醇。

6.用权利要求1或者2所述的菌株对半纤维素水解物进行同步脱毒发酵生产木糖醇的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.真空浓缩半纤维素水解物至木糖含量约100--150g/L，用碱(氢氧化钙，或氨水)调至pH 3--pH7，离心或过滤除去沉淀，加入酵母膏5g/L，得半纤维素水解物培养基；

S2.取培养好的CCTCC NO：M206098种子液，与等体积的CCTCC NO：M205067种子液混合，然后按5％(v/v)和用种量接入半纤维素水解物中，摇瓶培养至木糖消耗完；

S3.离心收集沉淀的酵母细胞并用于新鲜的培养基中，继续同步脱毒发酵。如此不断地循环，直至酵母细胞不能利用。

7.用权利要求1或者2所述的菌株对半纤维素水解物进行同步脱毒发酵生产乙醇的方法，其特征在乎，包括如下步骤：

S1.真空浓缩半纤维素水解物至木糖含量约100--150g/L，用碱(氢氧化钙，或氨水)调至pH 3--pH7，离心或过滤除去沉淀，加入酵母膏5g/L，得半纤维素水解物培养基；

S2.取培养好的CCTCC NO：M206098种子液，与等体积的CICC 1770种子液混合，然后按5％(v/v)和用种量接入半纤维素水解物培养基摇瓶中，培养至木糖消耗完；

S3.离心收集沉淀的酵母细胞循环用于发酵新鲜的培养基，继续同步脱毒发酵，如此不断地循环，直至酵母细胞不能利用；

S4.蒸馏回收离心上清液中的乙醇。