[发明专利]抗Lp(a)抗体制备及检测Lp(a)的诊断试剂盒

权利要求书

1.一种抗Lp(a)抗体的制备方法，其特征在于： 

（1）抗原的制备 

1）将从健康人群不同个体获得的血清的混合物与脂肪族表面活性剂混匀，使其形成表面活性剂-血清复合物；将38%的磷钨酸-镁慢慢加入到以上表面活性剂-血清复合物中，脂蛋白沉淀后用生理盐水洗涤； 

2）将洗涤后的脂蛋白沉淀物加入到预冷的体积比为3:2的无水乙醇/无水乙醚混合液中，不断搅拌，12小时过夜后，在4℃离心，弃上清，收集沉淀物再加入到预冷的体积比为3:2的无水乙醇/无水乙醚混合液中，不断搅拌，12小时过夜后，在4℃离心，弃上清，收集沉淀物； 

3）将上述脱脂后的沉淀物用已知的SDS-PAGE凝胶电泳，将Lp(a)凝胶带收集，捣碎，析出Lp(a),真空干燥后，于－20℃保存； 

4）将提取的真空干燥的Lp(a)抗原用生理盐水稀释成浓度为100mg/ml的液体抗原，再分别经弗氏佐剂等比例混合、乳化，获得FCA免疫抗原和FIA免疫抗原； 

（2）用免疫抗原多次接种对Lp(a)抗原敏感但又不易产生免疫耐受的健康兔子，羊、牛中任一种，获得含抗Lp(a)抗体的高免血清。 

2.一种检测Lp(a)的诊断试剂盒，其特征在于该试剂盒含有由权利要求1制备的含抗Lp(a)抗体的高免血清配制而成的抗体试剂、由权利要求1的由多人份的混合血清中提取出的Lp(a)配制的标准液和反应剂，该反应剂是由以下成分所配制：pH=7.2 Tris缓冲液250～350ml，氯化钠5～8g，聚乙烯二醇8000 50～70g，对羟基苯甲酸酯4～6g，链激酶-聚氧乙烯烷基芳醚溶液80～120ml，小牛血清白蛋白60～80g，纯化水补足到1000ml，其中链激酶-聚氧乙烯烷基芳醚溶液是由以下成分所配制：1000U链激酶溶解于100ml聚氧乙烯烷基芳醚，制成溶液。 

3.如权利要求2所述的一种检测Lp(a)的诊断试剂盒，其特征在于抗体试剂是由以下成分所配制：兔抗人Lp(a)抗体的血清稀释液1000ml，效价为1:32～1:64的兔抗人Lp(a)抗体的血清1000ml，柳氮磺胺吡啶-丙二醇溶液150ml，其中柳氮磺胺吡啶-丙二醇溶液是由 柳氮磺胺吡啶80g溶于150ml丙二醇中配成。 

4.如权利要求2所述的一种检测Lp(a)的诊断试剂盒，其特征在于标准液是由以下成分所配制：pH6～8的Tris缓冲液200ml,效价为1:16～1:32的Lp（a）抗原10g,柳氮磺胺吡啶-丙二醇溶液90～150ml,叠氮钠0.5g,小牛血清白蛋白40～60g,过氧乙酸纳4～7g,柠檬酸4～7g，纯净水加至1000ml。