[发明专利]能够产生蛋白质及能够在无谷氨酰胺的培养基上生长的谷氨酰胺营养缺陷型人类细胞

权利要求书

1.一种用外源DNA和可放大的基因转染的人谷氨酰胺营养缺陷型细胞，所述外源DNA编码糖基化蛋白质，或能改变编码所述糖基化蛋白质的内源基因表达，所述细胞还被编码谷氨酰胺合成酶的外源DNA转染，其中这些外源DNA位于一个以上DNA构建物上，所述转染的细胞能够产生所述糖基化蛋白质及能够生长在无谷氨酰胺和无血清的培养基中，所述可放大的基因是一种酶，选自：二氢叶酸还原酶、腺苷脱氨酶、天冬酰胺合成酶、天冬氨酸氨甲酰基转移酶、金属硫蛋白-1、鸟氨酸脱羧酶、P-糖蛋白质、核苷酸还原酶、胸苷激酶和黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶。

2.如权利要求1所述的人谷氨酰胺营养缺陷型细胞，其特征在于，所述人谷氨酰胺营养缺陷型细胞是永生的人谷氨酰胺营养缺陷型细胞。

3.如权利要求2所述的人谷氨酰胺营养缺陷型细胞，其中所述永生的人谷氨酰胺营养缺陷型细胞是人纤维肉瘤细胞。

4.如权利要求3所述的人谷氨酰胺营养缺陷型细胞，其中所述人纤维肉瘤细胞是HT1080细胞系。

5.如权利要求1-4任一所述的人谷氨酰胺营养缺陷型细胞，其中所述被转染的细胞是非固着依赖的，能在无血清、无谷氨酰胺培养基中悬浮生长。

6.如权利要求5所述的人谷氨酰胺营养缺陷型细胞，其中所述糖基化蛋白质是红血球生成素。

7.如权利要求6所述的人谷氨酰胺营养缺陷型细胞，所述红血球生成素是人红血球生成素。

8.一种产生糖基化蛋白质的方法，包括步骤：

(a)将权利要求1所述的谷氨酰胺营养缺陷型人类细胞在适合所述糖基化蛋白质表达的条件下培养于无血清培养基中，和

(b)取得所述糖基化蛋白质。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述培养基是无血清和无谷氨酰胺培养基。