[发明专利]H5N1亚型禽流感冷适应弱毒活疫苗的研制及其应用

权利要求书

1.一种重组H5N1亚型禽流感冷适应弱毒活疫苗，其特征在于表达H5N1亚型禽流感病毒的HA蛋白和NA蛋白。

2.根据权利要求1所述的重组H5N1亚型禽流感冷适应弱毒活疫苗，其还表达冷适应疫苗的6个蛋白：聚合酶PB2亚基(PB2)，聚合酶PB1亚基(PB1)，聚合酶PA亚基(PA)，核蛋白(NP)，基质蛋白(M)和非结构蛋白(NS)。

3.根据权利要求2的重组H5N1亚型禽流感冷适应弱毒活疫苗，其中所述冷适应疫苗是H2N2亚型冷适应弱毒疫苗株A/AnnArbor/6/60(AAca)。

4.根据权利要求1所述的重组H5N1亚型禽流感冷适应弱毒活疫苗，其中所述HA蛋白缺失了裂解位点的连续多个碱性氨基酸。

5.根据权利要求1至4中任一项的重组H5N1亚型禽流感冷适应弱毒活疫苗，其中所述HA蛋白和NA蛋白的氨基酸序列来源于H5N1亚型禽流感病毒株BHG/05，或来源于H5N1亚型禽流感病毒株AH/05。

6.一种生产根据权利要求1-5任何一项的重组H5N1亚型禽流感冷适应弱毒活疫苗的方法，该方法包括：

(1)构建两个表达质粒，所述两个表达质粒分别用于表达H5N1亚型禽流感病毒的HA蛋白和NA蛋白；

(2)构建六个表达质粒，所述六个表达质粒分别用于表达冷适应疫苗的6个蛋白：聚合酶PB2亚基(PB2)，聚合酶PB1亚基(PB1)，聚合酶PA亚基(PA)，核蛋白(NP)，基质蛋白(M)和非结构蛋白(NS)；

(3)将步骤(1)和(2)中获得的八个表达质粒共转染禽流感病毒复制许可的宿主细胞，培养转染后的宿主细胞；

(4)收获上清液，过滤后继续敏感细胞传代或接种鸡胚尿囊腔救获重组活疫苗。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述HA蛋白缺失了裂解位点的连续4个碱性氨基酸。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其中所述冷适应疫苗是H2N2亚型冷适应弱毒疫苗株A/AnnArbor/6/60(AAca)。

9.根据权利要求6或7所述的方法，其中所述HA蛋白和NA蛋白的氨基酸序列来源于H5N1亚型禽流感病毒株BHG/05，或来源于H5N1亚型禽流感病毒株AH/05。

10.根据权利要求6-9任一项所述的方法获得的重组H5N1亚型禽流感冷适应弱毒活疫苗。

11.根据权利要求1-5中任何一项的重组H5N1亚型禽流感冷适应弱毒活疫苗在制备治疗和/或预防禽流感病毒所导致的疾病的药物中的应用，优选所述药物用于治疗和/或预防动物或人的禽流感病毒感染。