[发明专利]一种快速检测微生物的测试片及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及食品微生物学安全检验检测领域，具体地说，涉及一种快速检测微生物的测试片及其制备方法和应用。

背景技术

现行国家食品卫生微生物检测标准方法的操作步骤繁琐，在检测微生物前后，需要配置培养基、清洗培养器皿、灭菌、增菌、培养时间长等，同时对实验员和实验室的要求高。在当今日益加快的商业贸易步伐下，传统检测方法已不能满足食品生产经营企业、进出口商检、政府管理部门的检测需要。

测试片以纸片、冷水可凝凝胶和无纺布等作为培养基载体来测定食品中微生物的含量，与国标方法比较，最大优点是省却了繁重的准备工作；检样不需要增菌，直接接种测试片，适宜温度培养后计数，使用后经灭菌便可弃置，简单方便，缩短检测时间。

然而，测试片的培养基载体对检测效果有重要影响，目前滤纸、凝胶和无纺布是三种主流载体。以滤纸为载体的测试片制作工艺简单，材料便宜，但滤孔过大，容易双面有菌落生长而无法准确计数；对检测有油脂食品，滤纸吸收较慢，难以扩散使样品液分布均匀；以无纺布为载体的测试片，具有使样液迅速地均匀扩散优点，但因其不透明且无纺布层较厚，载体下层菌落不能计数导致回收率稍低。美国3M公司的petrifilm的凝胶测试片，因片上层覆盖一层薄膜，当细菌产气、产粘液过多时会出现菌落扩散、融合的现象、影响计数；另因凝胶吸水速度较慢，样液易溢出培养基范围外，影响回收率。目前市场上的测试片均不透明，不能正反两面数菌以免遗漏，并且难通过自动数菌器计数；此外，除3M公司的petrifilm测试片外，各类产品均不能进行下一步挑菌鉴定。

因此，研发快速，准确，简便，能进行分离鉴定的微生物测试片，对我国的快速检测食品微生物安全具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种方便携带、使用简便、测试时间短、结果准确、可双面数菌，用于微生物检测的一次性测试片，并提供所述测试片的制备方法和应用。

为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

一种快速检测微生物的测试片，该测试片包括底板、中间镂空的胶片和塑料膜，中间镂空的胶片的底面与底板粘合，胶片中间镂空部分形成凹槽培养区，所述凹槽培养区内置有显色培养基；所述塑料膜的底面粘合有冷水可凝的凝胶剂，所述塑料膜的底面与胶片的上表面在一侧边缘粘合。

优选的，所述底板和胶片长宽一致；优选的，所述塑料膜与所述胶片的宽度一致，所述塑料膜的长度大于所述胶片的长度。

为了分辨不同的检验样品，明确检验时间，最好在所述塑料膜上粘合一张标签，标签上留有样品名和检验时间的填写栏。

所述塑料膜和底板均由防水透气、透明、无毒的聚乙烯塑料薄膜制备而成。塑料膜厚度为0.03～0.1mm，长度为9～13cm，宽度为7.0～11.0cm。底板厚度为0.03～0.25mm，长度为8.0～12.0cm，宽度为7.0～11.0cm。

所述胶片由透明、防渗透、质量轻的聚对苯二甲酸类塑料制备而成。厚度为0.3～0.5mm，长度为8.0～12.0cm，宽度为7.0～11.0cm，中间凹槽培养区是直径为4～7cm的圆形。

所述显色培养基是待测菌相应的商品培养基，由营养物质、诱导剂和显色剂组成，用量为1.5～4.0×10^-3g/cm²。

所述冷水可凝的凝胶剂为多糖类，用量为1.0～4.0×10^-3g/cm²。

本发明测试片底板和胶片、胶片和塑料膜、显色培养基和冷水可凝的凝胶剂都采用聚丙烯酸树脂压敏胶进行粘合。

一种制备快速检测微生物的测试片的方法，包括以下步骤：

1)按要求剪裁底板、中间镂空的胶片和塑料膜；

2)粘合底板和胶片的底面得到凹槽培养区，将显色培养基粘合在凹槽培养区内；

3)将冷水可凝的凝胶剂粘合在塑料膜的底面；

4)将胶片的上表面与塑料膜的底面在一侧边缘粘合；

5)辐照灭菌，封装。

所述辐照采用Co-60γ射线，辐射剂量3K～5KGy。

本发明所述测试片在检测食源性致病微生物中的应用，包括测定菌落总数、检测大肠杆菌、大肠菌群、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、铜绿假单胞菌等。

本发明所述的测试片的使用步骤为：

1)翻开上层塑料膜；

2)滴加1ml样品液于中间圆形镂空凹槽培养区；

3)盖上塑料膜；如样品液未能均匀分散，可用手把样品液推平；

4)经过合适温度培养，根据菌落显示颜色，选取跟菌落颜色对比较大的计数板组件作