[发明专利]检测一种或多种靶核酸的方法及其试剂盒

权利要求书

1.如下所述的检测试剂盒在制备用于在同一体系中检测样品中靶核酸的方法的 检测试剂产品中的应用，所述的检测试剂盒包括，

(1)转录/反转录试剂，所述转录/反转录试剂包含能扩增靶核酸序列的引物对， 所述引物对中的一条引物的5’端连接有启动子序列，而且所述转录/反转录试剂 具有所述启动子转录特异性的RNA聚合酶活性、反转录酶活性、DNA聚合酶活 性和RNase H活性；和

(2)PCR扩增试剂，所述PCR扩增试剂包含能扩增靶核酸序列的引物对，所 述引物对可以与转录/反转录试剂中的引物对相同或不相同，

其中，所述的在同一体系中检测样品中靶核酸的方法，其包括，

(1)将样品与转录/反转录试剂混合温浴，进行核酸转录和反转录，其中所述 转录/反转录试剂包含能扩增靶核酸序列的引物对所述引物对中的一条引物的5’ 端连接有启动子序列，而且所述转录/反转录试剂具有所述启动子转录特异性的 RNA聚合酶活性、反转录酶活性、DNA聚合酶活性和RNase H活性；和

(2)将步骤(1)得到的温浴产物与实时PCR扩增试剂混合，进行PCR扩增并实 时检测。

2.权利要求1所述的应用，其中靶核酸是RNA或DNA。

3.权利要求1所述的应用，其中步骤(1)中的温浴温度为36-45℃；和/或，其中 步骤(1)中的温浴时间为15-150分钟。

4.权利要求3所述的应用，其中步骤(1)中的温浴温度为38-43℃。

5.权利要求4所述的应用，其中步骤(1)中的温浴温度为40-42℃。

6.权利要求5所述的应用，其中步骤(1)中的温浴温度是恒定的。

7.权利要求6所述的应用，其中步骤(1)中的温浴温度为41℃。

8.权利要求3所述的应用，其中步骤(1)中的温浴时间为20-100分钟。

9.权利要求8所述的应用，其中步骤(1)中的温浴时间为30-80分钟。

10.权利要求9所述的应用，其中步骤(1)中的温浴时间为40-70分钟。

11.权利要求10所述的应用，其中步骤(1)中的温浴时间为60分钟。

12.权利要求1所述的应用，其中转录/反转录试剂包含启动子转录特异性的RNA 聚合酶、具有DNA聚合酶活性的反转录酶和RNase H。

13.权利要求12所述的应用，其中转录/反转录试剂包含解链酶。

14.权利要求1所述的应用，其中启动子是T7启动子或T3启动子。

15.权利要求1所述的应用，其中转录/反转录试剂包含T7RNA聚合酶、具有 DNA聚合酶活性的反转录酶、RNase H和解链酶、以及能扩增靶核酸序列的引 物对、dATP、dCTP、dGTP、dTTP、ATP、CTP、GTP和UTP，所述引物对中 的一条引物的5’端连接有T7启动子序列。

16.权利要求1所述的应用，其中实时PCR扩增试剂包含能扩增靶核酸序列的 引物对，所述引物对可以与转录/反转录试剂中的引物对相同或不相同。

17.权利要求16所述的应用，其中实时PCR扩增试剂包含标记有实时PCR检测 信号的能与靶核酸序列杂交的探针。

18.权利要求16所述的应用，其中实时PCR扩增试剂是实时PCR扩增试剂，其 包含能扩增靶核酸序列的引物对、标记有实时PCR检测信号的能与靶核酸序列 杂交的探针、dATP、dCTP、dGTP、dUTP和Taq酶。

19.权利要求18所述的应用，其中实时PCR扩增试剂还包含反转录酶和RNase 抑制剂。