[发明专利]一种治疗皮肤缺损的注射剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种组织填充剂及其制备方法，更具体地说，是一种治疗皮肤缺损的注射剂及其制备方法。

背景技术

人体软组织填充是作为修复软组织在损伤后的主要治疗方法。十九世纪就已经开始使用石蜡、硅氧烷进行填充。上个世纪八十年代之后又出现了明胶粉末材料，但其均有疗效不确定，毒副作用大等问题。

1997年之后，Isolagen采用自体成纤维细胞作为团组织填充材料，有了一定的疗效，但存在显效慢，疗效不显著等问题。

中国专利03155833.X中公开了一种除皱祛疤的注射剂，应用了自体皮肤，经体外分离、培养和扩增，制成于葡萄糖液中的一种注射剂，治疗疤痕和祛除皱纹。由于该技术使用的生物材料取自患者自体，无排斥反应，效果持久，但该技术的不足之处是，注射剂中能立即发挥人体软组织的填充和修复功能的胶原蛋白含量较低，导致注射到疤痕和皱纹处后见效较慢，一般要4-6个月；另外，使用动物血清作为培养液的成分也可能存在安全性方面的问题。

我们在2006年发明了采用自体的成纤维前体细胞和透明质酸构成的新的填充材料，有效的改善了单纯成纤维细胞治疗出现效果慢的缺陷，但是透明质酸最主要的作用是保水，对细胞的扩增和存活作用较弱。

本专利应用流产胎儿皮肤或新生儿包皮做为细胞培养来源，细胞活性好，并且治疗者可得到即时治疗，优于以往的自体细胞培养需要等待两个月的培养时间才能得到治疗。

发明内容

为了克服上述治疗皮肤缺损的注射剂的不足，本发明的目的在于提供一种立即见效、疗效持久、受术者满意度更高的治疗皮肤缺损的注射剂。

本发明的另一个目的是提供这种注射用填充剂的制备方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种治疗皮肤缺损的注射剂，该填充剂主要由细胞成分组成，每毫升注射用填充剂中细胞成分的含量为1000-5000万个；所述细胞成分是用流产胎儿皮肤或新生儿切除的包皮的皮肤经过体外低血清或无血清培养和扩增，收集得到的真皮成纤维干细胞、成纤维前体细胞、成纤维细胞中的至少一种。

优选地，在本发明所述填充剂中，所述的经培养和扩增后收集到的真皮成纤维干细胞、成纤维前体细胞、成纤维细胞的数量之比为10-20∶50-70∶20-30。

本发明所述的填充剂除了细胞成分，还可以含有一些辅助成分，所述辅助成分可以是本领域常见的能够加入到填充剂中的任何一种或多种成分，如自体胶原蛋白、维生素、葡萄糖、等渗生理盐水等等。

本发明使用的低血清培养基仅需添加3％～5％胎牛血清，而传统培养基通常加入约10％的新生牛血清，低血清培养基对于细胞生长、增殖、形态、活性和功能没有不良影响，甚至有所改善。

此外，本发明还提供了一种所述治疗皮肤缺损的注射剂的制备方法，该方法步骤为：采用流产胎儿皮肤或新生儿切除的包皮的皮肤进行体外低血清或无血清培养和扩增，对所得到的真皮成纤维干细胞、成纤维前体细胞、成纤维细胞进行收集。

本发明所采集的皮肤组织是流产胎儿皮肤或新生儿切除的包皮的皮肤，同时包括表皮和真皮。

在本发明所提供的填充剂制备方法中，将来源于流产胎儿皮肤或新生儿切除的包皮皮肤，例如，1-30平方毫米的皮肤，在加入了生长因子和活性材料的低血清或无血清培养液中进行体外培养和扩增，得到真皮成纤维干细胞、成纤维前体细胞、成纤维细胞。

所述体外低血清或无血清培养和扩增中，所述培养液的组成可以是本领域常用的基础培养液，例如，可以参见《细胞实验指南》中的有关介绍(2001年，科学出版社出版，主编：D.L.斯佩克特，黄培唐翻译)。优选地，在体外全程无血清培养和扩增过程中，使用的培养液中还包括生长因子和活性材料。所述生长因子为选自：上皮生长因子、成纤维生长因子中的一种或多种；所述活性材料选自：氢化可的松、肝素中的一种或多种。所述上皮生长因子在培养液中的含量可以为1至5纳克/毫升，优选为3纳克/毫升；所述成纤维生长因子在培养液中的含量可以为2至20纳克/毫升，优选为10纳克/毫升；所述氢化可的松在培养液中的含量可以为0.2至2微克/毫升，优选为1微克/毫升；所述肝素在培养液中的含量可以为2至20微克/毫升，优选为10微克/毫升。上述的培养液和生长因子及活性材料可以是选自一个公司或者多个公司(如美国的Cascade公司、Sigma公司、Hyclne公司等)的市售产品。