[发明专利]一种快速的利用基因重组酵母细胞筛选抗朊病毒药物的方法

权利要求书

1、一种快速的利用基因重组酵母细胞筛选抗朊病毒药物的方法，其特征在于步骤如下：

1)[GPSI⁺]酵母细胞的制备：

在野生型酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)内的朊病毒[PSI⁺]的编码基因SUP35上，将荧光标签GFP基因插在N和M结构域中间，使基因编码的Sup35p由NMC转变为NGMC，得到荧光标记[PSI⁺]朊病毒的[GPSI⁺]酵母细胞，其菌落颜色为浅粉色；

2)筛选抗朊病毒药物：

[GPSI⁺]酵母细胞的活化：取[GPSI⁺]酵母细胞接入1/2YPD培养液中，30℃振荡过夜培养；

[GPSI⁺]酵母细胞初始OD值的调试：调制[GPSI⁺]酵母细胞悬液OD₆₀₀＝0.5；

筛选待测药物：取无菌冻存管，分别加入待测药物、1/2YPD培养液以及调试好的[GPSI⁺]酵母细胞悬液，在24℃的条件下，振荡培养，每天定时取前一天冻存管中的[GPSI⁺]酵母细胞放入新的装有1/2YPD培养液和待测药物的无菌冻存管中，振荡培养1～5天；

检测：用荧光显微镜，观察药物作用的[GPS1⁺]酵母细胞中朊病毒的状态。