[发明专利]一种细菌筛选和鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种细菌筛选和鉴定方法，属于生化鉴定技术领域。

背景技术

细菌筛选和鉴定应用最广泛、最基础的方法是生化鉴定方法。目前的细菌生化筛选和鉴定方法所涵盖的分类单元数量较少，一般仅有几十种，其中未囊括一些重要的细菌种类，如大肠埃希氏菌O157:H7、椰毒假单胞酵米面亚种(Burkholderia cocovenenans subsp.farinofermentans)等；而且，随着细菌名称的改变，有些筛选和鉴定方法对细菌的命名已经不够准确；此外，多数筛选和鉴定方法都需要先进行繁琐的染色、氧化酶等试验。

发明内容

针对上述筛选和鉴定方法存在的缺点，本发明的目的是提出一种更全面、更准确、更便捷的细菌筛选和鉴定方法。

本发明技术方案的步骤如下：

(1)确定细菌筛选和鉴定所需生化试验项目。选用常用的、方便配制的生化试验项目，舍弃操作繁琐的诸如硝酸盐还原、苯丙氨酸脱氨酶等常用试验。另外，考虑到鉴定时可以借用商业化生化鉴定条，因此尽量使用商业化生化鉴定系统中包括的生化项目。最终确定如下20项：β-半乳糖苷酶(ONPG)、精氨酸双水解酶(ADH)、赖氨酸脱羧酶(LDC)、鸟氨酸脱羧酶(ODC)、柠檬酸盐利用(CIT)、硫化氢产生(H2S)、尿素酶(URE)、吲哚(IND)、伏普(VP)、明胶液化(GEL)、甘露醇(MAN)、肌醇(INO)、山梨醇(SOR)、鼠李糖(RHA)、蔗糖(SAC)、蜜二糖(MEL)、苦杏仁苷(AMY)、阿拉伯糖(ARA)、乳糖(LAC)、木糖(XYL)。

(2)搜集各种菌株上述20项生化试验项目的阳性概率。通过查阅权威的鉴定手册和检测标准，如：《伯杰氏细菌鉴定手册》(第九版)、《伯杰氏细菌系统手册》(第二版)、《全国临床检验操作规程》(第三版)、《临床微生物学手册》(第七版)等，最终获得288个分类单元的20项生化试验结果，该288个分类单元如下：Acinetobacter baumannii/A.calcoaceticus，Acinetobacter lwoffi，Actinobacillus capsulatus，Actinobacillus equuli，Actinobacillus hominis，Actinobacillus lignieresii，Actinobacillus muris，Actinobacilluspleuropneumoniae，Actinobacillus seminis，Actinobacillus suis，Actinobacillus ureae，Aeromonascaviae，Aeromonas eucrenophila，Aeromonas hydrophila，Aeromonas media，Aeromonassalmonicida subsp.achromogenes，Aeromonas salmonicida subsp.masoucida，Aeromonassalmonicida subsp.salmonicida，Aeromonas salmonicida subsp.smithia，Aeromonas schubertii，Aeromonas sobria，Paenibacillus alvei，Bacillus amyloliquefaciens Bacillus anthracis，Bacillusbadius，Brevibacillus brevis，Bacillus cereus，Bacillus circulans，Bacillus coagulans，Bacillusfimus，Brevibacillus laterosporus，Bacillus lentus，Bacillus licheniformis，Paenibacillus macerans，Bacillus megaterium，Bacillus mycoides，Bacillus pantothenticus，Paenibacillus polymyxa，Bacilluspumilus，Bacillus sphaericus，Bacillus stearothemrophilus，Bacillus subtilis，Bordetellaspp./Alcaligenes spp./Moraxella spp.，Budvicia apuatica，Burkholderia cepacia，Burkholderiacocovenenans subsp.farinofermentans，Buttiauxella agrestis，Buttauxella brennerae，Buttiauxellaferragutiae，Buttiauxella gaviniae，Buttiauxella izardii，Buttiauxella noackiae，Buttiauxellawarmboldiae，Cedecea sp．，Cedecea davisae，Cedecea lapagei，Cedecea neteri，Chromobacteriumviolaceum，Chrvseomonas luteola，Chryseobacterium indologenes，Chryseobacteriummeningosepticum，Citrobacter braakii，Citrobacter farmeri，Citrobacter freundii，Citrobacteramalonaticus，Citrobacter koseri，Citrobacter farmeri，Citrobacter gillenii，Citrobacter murliniae，Citrobacter robentium，Citrobacter sedlakii，Citobacter werkmanii，Citrobacter youngae，Edwardsiella hoshinae，Edwardsiella ictaluri，Edwardsiella tarda，Eikenlla corrodena，Enterobacter aerogenes，Enterobaster amnigenus，Enterobacter asburiae，Enterobactercancerogenus，Enterobacter cloacae，Euterobacter dissolvens，Enterobacter gergoviae，Enterobacter hormaechei，Enterobacter intermedius，Enterobacter nimipressuralis，Enterobactersakazalii，Erwinia cacticida，Erwinia persicinus，Escherichia blattae，Escherichia coli，Escherichiacoli O157:H7，Escherichia fergusonii，Escherichia hermannii，Escherichia vulneris，Ewingellaamericana，Flavimonas oryzihabitans，Haemophilus actinomycetemcomitans，Haemophilusaphrophilus，Haemophilus ducreyi，Haemophilus haemoglobnophilus，Haemophilus haemolyticus，Haemophilus influenzae，Haemophilus paracuniculus，Haemophilus paragallinarum，Haemophilusparahaemloyticus，Haemophilus parainfluenzae，Haemophilus paraphrohaemliyticus，Haemophilus paraphrophilus，Haemophilus parasuis，Haemophilus segnis，Hafnia alvei，Klebsiellaornithinolytica，Klebsiella oxytoca，Klebsiella oxytoca ornithine positive，Klebsiella planticola，Klebsiella pneumoniae subsp.ozaenae,Klebsiella pneumoniae subsp.pneumoniae，Klebsiellapneumoniae subsp.rhinoscleromatis，Klebsiella terrgena，Klebsiella spp.，Kluyvera ascorbata，Kluyvera cryocrescens，Kluyvera georgiana，Leclercia adecarboxylata，Leminorella grimontii，Leminorella richardii，Listeria monocytogenes，Listeria grayi，Listeria ivanovii，Listeriawelshimeri，Listeria innocua，Listeria seeligeri，Listeria murrayi，Listonella anguillarum，Listonellapelagius，Moellerella wisconsensis，Morganella morganii，Morganella morganii subsp.sibonii，Moritella marina，Myroides odoratus，Non-fermenter spp，Obesumbacterium proteus，Ochrobactrum anthropi，Pantoea agglomerans，Pantoea dispersa，Pantoea ananatis，Pantoea spp.，Pantoea stewartii，Pantoea uredovora，Pasteurella aerogenes，Pasteurella anatis，Pasteurellaavium，Pasteurella bettyae，Pasteurella caballi，Pasteurella canis，Pasteurella dagmatis，Pasteurella gallinarum，Pasteurella granulomatis，Pasteurella haemolytica，Pasteurella langaa，Pasteurella lymphangitidis，Pasteurella mairii，Pasteurella multocida subsp.gallicida，Pasteurellamultocida subsp.multocida，Pasteurella multocida subsp.septica，Pasteurella pneumotropica，Pasteurella stomatis，Pasteurella testudinis，Pasteurella trehalosi，Pasteurella volantium，Pasteurella pneumotropica/P.haemolytica，Photobactarium angustum，Photobacterium damselasubsp.damsela，Photobacterium iliopiscarium，Photobacterium leiognathi，PhotobacteriumPhosphoreum，Photorhabdus asymbiotica，Photorhabdus luminescens，Plesiomonas shigelloides，Pragia fontium，Proteus mirabilis，Proteus myxofaciens，Proteau penneri，Proteau vulgaris，Providencia alcalifaciens，Providencia heimbachae，Providencia rettgeri，Providencia rustigianii，Providencia stuartii，Psendomonas aeruginosa，Pseudomonas fluorescens/P.putida，Pseudomonasstutzeri，Rahnella aquatilis，Salinivibrio costicola，Salmonella choleraesuis subsp.arizonae，Salmonella choleraesuis subsp.choleraesuis，Salmonella choleraesuis subsp.diarizonae，Salmonella choleraesuis subsp.houtenae，Salmonlla choleraesuis subsp.indica，Salmonellacholeraesuis subsp.salamae，Salmonella Gallinarum，Salmonella Paratyphi A，SalmonellaPullorum，Salmonella Typhi，Salmonella spp.，Sreeatia entomophila，Serratia ficaria，Serratiafonticola，Serratia grimesii，Serratia marcescens，Serratia odorifera，Serratia plymuthica，Serratiaproteamaculans，Serratia proteamaculans subsp.proteamaculans，Serratia rubidaea，Shewanellaputrefaciens，Shigella spp.，Shigella boydii，Shigella dysenterias，Shigella flexneri，Shigella sonnei，Sphingobacterium multivorum，Sphingomonas paucimobilis，Stenotrophomonas maltophilia，Tatumella ptyseos，Trabulsiella guamensis，Vibrio aestuarianus，Vibrio alginolyticus，Vibriocampbellii，Vibrio cholerae，Vibrio cincinnatiensis，Vibrio diazotrophicus，Vibrio fischeri，Vibriofluvidlis，Vibrio furnissii，Vibrio gazogenes，Vibrio harveyi，Vibrio hollisae，Vibrio ichthyoenteri，Vibrio logei，Vibrio mediterranei，Vibrio mestchnikovii，Vibrio mytili,Vibrio mimicus，Vibrionatriegens，Vibrio mereis，Vibrio nigripulchritudo，Vibrio ordalii，Vibrio，orientalis，Vibrioparahaemolyticus，Vibrio pectenicida，Vibrio penaeicida，Vibrio proteolyticus，Vibrio scophthalmi，Vibrios plendidus，Vibrio tapetis，Vibrio trachuri，Viborio tubiashii，Vibrio vulnificus，Xenorhabdusnematophilus，Yersinia aldovae，Yersinia bercovieri，Yersinia enterocolitica，Yersinia frederiksenii，Yersinia intermedia，Yersinia kristensenii，Yersinia mollaretii，Yersinia pestis，Yersiniapseudotuberculosis，Yersinia rohdei，Yersinia ruckeri，Yokenella regensburgei。