[发明专利]一种从千层塔中提取分离高纯度石杉碱甲的新方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从中草药千层塔中提取分离高纯度石杉碱甲的方法。

背景技术

千层塔是蕨类植物石杉科石杉属蛇足石杉的全草，民间应用于散瘀化血、消肿止疼、除湿、清热解毒。其所含生物碱石杉碱甲和石杉碱乙具有很强的抑制胆碱脂酶活性，临床实验证实石杉碱甲对治疗早老性痴呆有显著疗效。从千层塔中提取的石杉碱甲，是中国独创的一种新药。属于可逆性胆碱酯酶抑制剂，是目前治疗良性记忆障碍和早老性痴呆症最为安全有效的药物之一。

现已有文献报道提取制备石杉碱甲的方法。

沈生荣等〔石杉碱甲提取工艺研究，浙江大学学报(农业与生命科学版)2002，28(6)，591-595〕系统研究了石杉碱甲的提取工艺。系用有机酸浸提、萃取、反萃取、脱色和重结晶等化学分离技术从千层塔中提取、纯化石杉碱甲。可得到纯度大于99％的高纯度石杉碱甲。

杨明等〔HPLC法制备石杉碱甲，解放军药学学报2003，19(5)，352-354〕建立了用制备型HPLC制备石杉碱甲的方法。用常规的方法提取出石杉总生物碱，总生物碱经HPLC直接进样，以氯仿-甲醇-氨水(840∶24∶1.2)为流动相，可得到纯度大于90％的石杉碱甲。

刘建廷等〔石杉碱甲提取工艺研究，天然产物研究与开发2006，18：298-301〕研究了以蛇足石杉为原料，采用生物碱分离的传统方法，通过盐酸浸提，氯仿萃取来制取纯化石杉碱甲。

陈建华等〔高速逆流色谱技术制备石杉碱甲单体，中国现代应用药学杂志2006，23(4)，295-297〕运用高速逆流色谱技术，以n-Hexane/n-BuOH/H₂O(4∶1∶5，V/V/V)为两相溶剂体系，在优化的工艺参数条件下，获得了单体纯度为98.6％(HPLC)的石杉碱甲单体。

近年来也出现了一些有关制备石杉碱甲的专利文献。

《一种从千层塔中提取分离石杉碱甲的方法》(中国专利，CN 101134743A)用有机溶剂提取，调酸；阳离子交换树脂色谱分离，洗脱，浓缩成浸膏；经硅胶搅拌，上硅胶柱色谱，混合洗脱剂洗脱，浓缩，结晶，可得纯度达98％的石杉碱甲。

《一种高纯度石杉碱甲的制备方法》(中国专利，CN1587260A)用正构烷烃-脂肪醇-水作为溶剂体系，用高速逆流色谱法从石杉属植物千层塔中分离高纯度石杉碱甲。

《从中草药千层塔中提取石杉碱甲的方法》(中国专利CN1448390A)应用以下工艺步骤制备石杉碱甲：原料粉碎→浸渍→浓缩→萃取(反复)→柱层析→结晶→高效液相色谱选段→浓缩干燥→成品，纯度达到98％以上。

《一种分析与分离制备石杉碱甲和石杉碱乙的方法》(中国专利，CN1704405A)采用原料粉碎浸泡→大孔吸附树脂富集浓缩→反相柱层析→非烷基键合相硅胶介质柱层析→浓缩结晶的工艺制备分离，最后可获得纯度＞98％的石杉碱甲和石杉碱乙。

《从植物中提取石杉碱甲的工艺》(中国专利，CN1861580A)采用石筋草为原料和原料粉碎→酸液浸泡→浓缩→活性炭脱色→调节pH值→氯仿萃取→减压回收→硅胶拌样挥发→乙醇氯仿溶液洗脱→减压回收→结晶→干燥的工艺，提取石杉碱甲。

上述各种方法或得到的产品纯度较低，或收率较低，或操作比较麻烦，有的生产成本较高，生产规模较小，不能满足市场需求。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种操作简便、分离量大，综合成本低，生产周期短的快速制备高纯度石杉碱甲的方法。本发明是一种从千层塔中提取纯化石杉碱甲的方法，其技术方案包括如下步骤：

(1)提取液的制备：①将粉碎好的千层塔，加3-25倍量的0.2-2％硫酸，常温浸泡1-24小时；②渗漉提取至流出液中检测不出石杉碱甲，收集滤液得到提取液备用；

本发明的技术方案中，千层塔的乙醇提取物还包括了超声波提取法，具体方法如下：

①将粉碎好的千层塔药材，加3-25倍量的0.2-2％硫酸，常温浸泡0-24小时，超声波超声处理10-60min，分离出药液；②向药渣中加入药渣量2-10倍的提取溶剂，用超声波超声处理10-50min，分离出药液；③合并药液，采用过滤、离心等方法除去提取液中的杂质，得到千层塔提取液。

(2)大孔树脂预分离：①将提取液用氨水调pH至8-10，上大孔吸附树脂柱；②第一次使用0-15％的乙醇洗脱，洗脱液弃去；③第二次使用15-70％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得提取物浸膏备用；