[发明专利]一种定量海水中石莼属海藻显微阶段总个体数的方法

说明书

技术领域

本发明涉及石莼属绿潮海藻爆发的预测方法，具体的说是一种准确定 量海水中石莼属Ulva(包括原浒苔属Enteromorpha)海藻显微阶段总个体 数的方法。

背景技术

绿潮爆发是一个由浒苔特殊的生长和繁殖特点、海洋气候环境和独特 的沿海水产养殖习惯等几个方面综合作用的结果。因此，每一方面的深入 研究都会为评估绿潮爆发起到积极作用。而在这其中的生物学方面中，如 何准确定量海水中石莼属海藻个体数这一问题，尤其显得特别重要。在实 际的沿海和海上考察中，目前尚没有有效地的技术方法来准确定量海水中 的石莼属海藻个体数的方法，从而无法准确的估计海水中潜在的浒苔生物 量。抽滤法即通过将海水抽滤到0.45μm或0.22μm滤膜上，统计海水中配 子或者孢子数量的方法不可靠，因为石莼属海藻的配子和孢子与很多单细 胞海藻很难区分；同时由于不同石莼属海藻的初期发育阶段很难区分，得 到的结果无法从石莼属类别上统计。

发明内容

本发明提供一种准确定量海水中石莼属Ulva(包括原浒苔属 Enteromorpha)显微阶段海藻总个体数的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

定量海水中石莼属海藻显微阶段总个体数的方法：

1)预处理，样品海水用100目的纱绢网过滤，1L过滤后的海水样品 中加入500μL饱和二氧化锗水溶液，而后加入f/2营养盐(母液A和B各 1mL)充气培养；

2)培养条件，将加入f/2营养盐的海水在温度为15-20℃、光强为50-100 μmol photons m^-2s^-1、光周期为12h白天：12h黑夜条件下充气(空气)培养， 培养7天后更换1L新鲜的f/2培养液，以后每5天换一次培养液，培养3-4 周，待用；

3)统计，经培养后即可以确定每升海水中石莼属海藻总的个体数量。

所述培养后的器皿中可见不同石莼属海藻物种长成的幼苗，包括不同 石莼属物种的孢子或者配子体及其它繁殖方式形成的幼苗；而后通过显微 观察，可以区分石莼和浒苔，并统计石莼属海藻的总数量，即可以确定每 升海水中石莼属海藻总的个体数量；最后收集幼苗在步骤2的培养条件下， 继续培养6周后根据不同的海藻形态特征进行分类。

所述f/2营养盐成分由母液A和母液B组成，其中母液A包括：NaNO₃74.8g，KH₂PO₄4.4g，溶于1L蒸馏水；母液B包括：ZnSO₄·4H₂O 23mg， MnCl₂·4H₂O 178mg，CuSO₄·5H₂O 10mg，FeC₆H₅O₇·5H₂O 3.9g， Na₂MoO₄·2H₂O 7.3mg，CoCl₂·6H₂O 12mg；Na₂EDTA 4.35g溶于1L蒸馏水。 1L海水样品加母液A和B各1mL.1L新鲜的f/2培养液是由1L消毒海水 加母液A和B各1mL配制而成。

所述样品海水通过100目的纱绢网滤掉水中可见的藻体残渣。所述光 周期为12h白天：12h黑夜条件下，充气培养为充过滤的空气。

本发明所具有的优点：

1.本发明方法可以最大可能的定量海水中显微阶段可以培养的石莼属 海藻的数量。

2.采用本发明定量计数的方法消除了在自然界条件下，因为自然外力和 机械损伤等导致的死亡或因以石莼属海藻为食物的天敌捕食造成的数量减 少。

3.本发明定量计数的方法采用最优的生长条件使石莼属浒苔生长同步 化，虽然天然海水中的石莼属海藻处于不同的显微生长阶段，但是通过提 供最优的生长条件，不同阶段的不同种类的石莼属海藻在培养3-4周左右都 可以发育形成肉眼可见的幼苗。

4.本发明定量计数的方法将收集获得的不同石莼属海藻生长在相同培 养条件下，其克服了不同环境条件对石莼属海藻形态建成的诱导效应，使 得依据藻体的形态分类更加可靠。