[发明专利]苏木素在测定细胞增殖活性和药物对细胞毒效应中的应用

权利要求书

1.苏木素在测定细胞增殖活性和药物对细胞毒效应中的应用，其特征在于：适用于贴壁细胞 Huvec或M21的细胞增殖活性的测定，测定方法为：取已稀释好的Huvec或M21细胞的 待测细胞悬液，置于细胞培养板的各相应孔板中，每孔200μl，于37℃、体积分数为5％ 的CO2饱和湿度条件下，孵育44小时，甩弃上清，立即加入4％的多聚甲醛溶液，每孔 100μl，固定20分钟后收集固定液，PBS洗3次，弃上清，室温晾干；取苏木素染色液， 每孔加入100μl，20分钟后收集染色液，蒸馏水洗3～5次，以去除未结合的染料，室温 晾干；于倒置显微镜下观察细胞着色状况，再加入1％的盐酸酒精，100μl/孔，此时各孔 液体呈现不同程度的粉红色，20分钟内用酶标仪测定540nm处的吸光度值并记录，取各 组OD值均数并绘制细胞系增殖曲线；

适用于药物VCR、5-Fu、CDDP或金荞麦提取物对贴壁肿瘤细胞M21、SGC7901或VX2的细 胞毒效应的测定，测定方法为：取经药物VCR、5-Fu、CDDP或金荞麦提取物处理的M21、 SGC7901或VX2细胞的待测细胞液，置于细胞培养板的孔板中，每孔200μl，同时设定无 药物细胞对照和培养基酶标仪调零孔，于37℃、体积分数为5％的CO₂饱和湿度条件下， 孵育44小时；取出细胞培养板甩弃上清，立即加入4％的多聚甲醛溶液，150μl/孔，固定 20分钟后收集固定液；PBS洗3次，弃上清，室温晾干；取苏木素染色液，每孔加入100 μl，20分钟后收集染色液；蒸馏水洗3～5次以去除未结合的染料，室温晾干；于倒置显 微镜下观察细胞着色状况，再加入1％的盐酸酒精，100μl/孔，此时各孔液体呈现不同程 度的粉红色，20分钟内用酶标仪测定540nm处的吸光度值并记录，按下式计算药物的抑 瘤率：

抑制率(％)＝1-(实验孔OD值/细胞对照孔OD值)×100％；

其中，实验孔OD值表示实验组各孔OD值的均数；细胞对照孔OD值表示无药细胞对照 组各孔OD值的均数。

2.一种利用苏木素测定贴壁细胞增殖活性的方法，其特征在于，步骤如下：取已稀释好的 Huvec或M21细胞的待测细胞悬液，置于细胞培养板的各相应孔板中，每孔200μl，于 37℃、体积分数为5％的CO₂饱和湿度条件下，孵育44小时，甩弃上清，立即加入4％的 多聚甲醛溶液，每孔100μl，固定20分钟后收集固定液，PBS洗3次，弃上清，室温晾 干；取苏木素染色液，每孔加入100μl，20分钟后收集染色液，蒸馏水洗3～5次，以去 除未结合的染料，室温晾干；于倒置显微镜下观察细胞着色状况，再加入1％的盐酸酒精， 100μl/孔，此时各孔液体呈现不同程度的粉红色，20分钟内用酶标仪测定540nm处的吸 光度值并记录，取各组OD值均数并绘制细胞系增殖曲线。

3.一种利用苏木素测定药物对肿瘤细胞系毒性作用的方法，其特征在于，步骤如下：取经药 物VCR、5-Fu、CDDP或金荞麦提取物处理的M21、SGC7901或VX2细胞的待测细胞液，置 于细胞培养板的孔板中，每孔200μl，同时设定无药物细胞对照和培养基酶标仪调零孔， 于37℃、体积分数为5％的CO₂饱和湿度条件下，孵育44小时；取出细胞培养板甩弃上 清，立即加入4％的多聚甲醛溶液，150μl/孔，固定20分钟后收集固定液；PBS洗3次， 弃上清，室温晾干；取苏木素染色液，每孔加入100μl，20分钟后收集染色液；蒸馏水 洗3～5次以去除未结合的染料，室温晾干；于倒置显微镜下观察细胞着色状况，再加入 1％的盐酸酒精，100μl/孔，此时各孔液体呈现不同程度的粉红色，20分钟内用酶标仪测 定540nm处的吸光度值并记录，按下式计算药物的抑瘤率：

抑制率(％)＝1-(实验孔OD值/细胞对照孔OD值)×100％；

其中，实验孔OD值表示实验组各孔OD值的均数；细胞对照孔OD值表示无药细胞对照 组各孔OD值的均数。