[发明专利]一种沙丁胺醇酶联免疫检测试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于检测动物组织、饲料及尿液中的沙丁胺醇药物残留量的酶联免疫检测试剂盒，属于兽药残留的检测分析技术领域。

背景技术

沙丁胺醇是一种β-兴奋剂类药物，迄今为止，人们已经合成了克伦特罗(clenbuterol)、卡布特罗(carbuterol)、莱克多巴胺(ractopamine)、沙丁胺醇(salbutamol)等十余种β-兴奋剂。β-兴奋剂影响营养物质在动物体内的流向和分配，具有促进肌肉组织生长，降低胴体脂肪含量，提高瘦肉率以及增加瘦肉产量的作用，因此在欧美地区曾经被广泛应用。但是，β-兴奋剂具有类似肾上腺素的化学结构及作用机理，能与细胞表面的β-受体结合而引起心悸、头疼、目眩、恶心、呕吐、战栗、神经过敏、血管扩张、心率加快等生理反应，而且对人与动物的肝肾等内脏器官具有毒副作用。现在欧美各国均禁止其在畜牧生产上的应用，美国规定只能用于科研，我国有关部门也将β-兴奋剂类药物列入了《食品动物禁用的兽药及其他化合物清单》。但是受经济利益的驱动，在畜牧生产中仍然存在违规使用现象，导致部分动物产品的禁用药物残留量过高，难以达到发达国家的要求，损害了我国畜禽产品的声誉，制约了整个产业的健康发展。为了实现畜牧业的健康发展，维护人们的健康，我国正不断加大该类药物的检测力度，制定更为严格的法律和规范措施。目前，对于β-兴奋剂药物的残留检测方法主要有高效液相色谱法、气相色谱法、液相-质谱联用法等。这些方法的特点是准确、稳定、可靠，但缺点同样明显，即仪器法所用仪器设备往往价格昂贵，结构复杂，需要专门的操作人员，所以难用于现场操作，而且仪器法所需的各种试剂容易造成环境污染。

发明内容

本发明的目的是提供一种沙丁胺醇酶联免疫检测试剂盒及其应用，它能克服现有技术的上述缺点。

一种沙丁胺醇酶联免疫检测试剂盒，有一盒体，其特征在于盒体内装有：(1)包被有沙丁胺醇包被抗原的酶标板、(2)酶标记的抗抗体、(3)沙丁胺醇特异性多克隆抗体、(4)沙丁胺醇标准品溶液、(5)浓缩洗涤液、(6)浓缩复溶液、(7)底物显色液A、(8)底物显色液B、(9)终止液。

上述沙丁胺醇酶联免疫检测试剂盒在于检测动物组织、饲料及尿液中沙丁胺醇残留量中的应用。

本发明结构简单、价格低廉，易于携带，使用时简单快捷，便于现场操作。

附图说明

附图为本发明沙丁胺醇酶联免疫检测试剂盒的标准曲线图。

具体实施方式

本发明沙丁胺醇酶联免疫检测试利盒有一盒体，其特征在于盒体内装有：(1)包被有沙丁胺醇包被抗原的酶标板、(2)酶标记的抗抗体、(3)沙丁胺醇特异性多克隆抗体、(4)沙丁胺醇标准品溶液、(5)浓缩洗涤液、(6)浓缩复溶液、(7)底物显色液A、(8)底物显色液B液、(9)终止液。

本发明中所述的沙丁胺醇包被抗原为采用重氮化法将盐酸克伦特罗半抗原与载体卵清蛋白进行偶联得到的，所述的酶标板优选96孔酶标板。

制备包被有沙丁胺醇包被抗原的酶标板时：

(1)用复溶工作液(0.015mol/L pH＝9.5)将沙丁胺醇半抗原与载体蛋白(卵清蛋白或者牛血清蛋白)的偶联物稀释成包被液(偶联物浓度为2.5ug/mL～20ug/mL)，其中载体蛋白优选卵清蛋白，偶联物工作液浓度优选10ug/mL；

(2)向96孔酶标板的各孔中加入100uL包被抗原工作液，置37℃环境下温育2～4h，或者置于4℃环境下静止过夜，倾去包被液，用洗涤工作液洗涤2～4次，每次3～5min，拍干；

(3)向酶标板的每孔中加入150～250uL封闭液，其中封闭液加入量优选250mL，置37℃环境下温育2-4h，或者置于4℃环境下静止过夜，倾去封闭液，用洗涤工作液洗涤2～4次，每次3～5min，拍干，干燥后用铝膜封闭低温(4℃)保存。

所述酶标记抗抗体为辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体，羊抗兔抗体为以兔源抗体为免疫原对无病原山羊进行免疫得到的，酶标记方法为过碘酸钠法将辣根过氧化物酶与羊抗兔抗体进行偶联。

所述的沙丁胺醇标准品溶液为具有8个浓度梯度的沙丁胺醇溶液，浓度分别为0ug/L、1.0ug/L、2.0ug/L、5.0ug/L、10.0ug/L、20.0ug/L、50.0ug/L、100.0ug/L。所述的沙丁胺醇特异性多克隆抗体为兔源多克隆抗体，经复溶工作液1000～2000倍稀释，免疫原是采用对氨基苯甲酸法将沙丁胺醇半抗原与载体蛋白偶联得到的，其中载体蛋白优选牛血清蛋白，稀释倍数优选1000倍。

沙丁胺醇特异性多克隆抗体通过如下步骤制备：