[发明专利]纳米增效糖基功能化细菌毒素分子印迹膜基片及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种纳米增效的糖基功能化细菌毒素分子印迹膜基片，包括金石英晶体基片，其特征在于：以糖基功能化细菌毒素分子印迹聚合物作为偶联剂在所述金石英晶体基片表面形成多层相互交替的纳米材料和糖基功能化细菌毒素分子印迹聚合物；

所述糖基功能化细菌毒素分子印迹聚合物是将细菌毒素模板分子、糖分子功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂按摩尔比为0.1～2∶2.5∶0.1～5∶40～80∶0.01～0.10∶1.0～15的比例聚合而成；

所述纳米材料为纳米金、碳纳米管或纳米铂；

所述细菌毒素模板分子为白喉毒素、破伤风毒素、肉毒杆菌毒素、志贺氏毒素、中毒性休克毒素、链球菌致热外毒素、霍乱毒素或绿脓杆菌外毒素；

所述糖分子功能单体为A-D-吡喃糖基甘露糖、N-乙酰糖胺、N-乙酰乳糖胺、唾液酸神经节苷脂或神经酰胺三己糖苷。

2.根据权利要求1所述的细菌毒素分子印迹膜基片，其特征在于：所述交联剂为三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、N，N-亚甲基二丙烯酰胺、N，N-1，4-亚苯基二丙烯酰胺、3，5-二(丙烯酰胺)苯甲酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯、二乙烯基苯、N，O-二丙烯酰-L-苯丙胺醇、季戊四醇三丙烯酸酯或季戊四醇四丙烯酸酯；所述引发剂为偶氮二异丁腈；所述致孔剂为二氯甲烷、氯仿、乙腈、甲醇、异丙醇、四氯化碳、N，N-二甲基酰胺或二甲基亚砜；所述有机溶剂为二氯甲烷或四氯化碳。

3.一种权利要求1或2所述的细菌毒素分子印迹膜基片的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)选择能与细菌毒素特异性识别并能够合成相应分子印迹聚合物的糖分子功能单体；

(2)将细菌毒素模板分子、糖分子功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂按摩尔比＝0.1～2∶2.5∶0.1～5∶40～80∶0.01～0.10∶1.0～15混合均匀制成分子印迹聚合物溶液；

(3)将纳米材料按照现有方法制备成纳米材料溶液；

(4)利用基片表面修饰技术，将纳米材料和分子印迹聚合物修饰到金石英晶体基片表面。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：将纳米材料和分子印迹聚合物修饰到金石英晶体基片表面包括以下步骤：

(1)将金石英晶体基片用去离子水清洗，再用纯甲醇浸泡1小时，然后用去离子水冲洗3遍，再用超声波清洗3min，晾干；

(2)将制备的纳米材料溶液超声处理20-60min，得到分散的纳米溶液；

(3)将金石英晶体基片表面浸泡于分散的纳米溶液中5-10min，取出晾干；

(4)将晾干的金石英晶体基片表面再浸泡于分子印迹聚合物溶液中5-10min取出，用洗脱剂洗脱20-30min，再于室温下干燥5-10min；

(5)重复步骤(3)、(4)过程4-7次，制得所述分子印迹膜基片。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于还包括以下步骤：将制得的分子印迹膜基片浸入pH6.8-7.5的缓冲液，保存在4℃冰箱，12-24h后使用。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述洗脱剂为乙腈、水、甲醇-乙酸或乙腈-乙酸。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述缓冲液为柠檬酸-磷酸溶液。

8.一种细菌毒素的检测方法，其特征在于包括以下步骤：将按权利要求3-7中任一项所述的细菌毒素分子印迹膜基片的制备方法制得的分子印迹膜基片连接到压电石英晶体微天平，对环境样品提取液中的细菌毒素进行检测。