[发明专利]纳米增效的细菌毒素糖基功能化分子印迹柱的制备方法及应用

权利要求书

1.一种纳米增效的细菌毒素糖基功能化分子印迹柱的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)选择能与细菌毒素合成糖基功能化分子印迹聚合物的糖类化合物功能单体；

(2)将细菌毒素模板分子、糖类化合物功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂按一定摩尔比混合均匀制成糖基功能化分子印迹聚合物溶液；

(3)选取纳米材料，按照现有方法制备纳米溶液；

(4)利用表面修饰技术，将纳米材料和糖基功能化分子印迹聚合物修饰到玻璃管柱内表面上。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述细菌毒素模板分子、糖类化合物功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂的摩尔比为0.1～2∶2.5∶0.1～5∶40～80∶0.01～0.10∶1.0～15。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述糖类化合物功能单体为A-D-吡喃糖基甘露糖、N-乙酰糖胺、N-乙酰乳糖胺、唾液酸神经节苷脂或神经酰胺三已糖苷；所述交联剂为三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、N、N-亚甲基二丙烯酰胺、3，5-二(丙烯酰胺)苯甲酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯、二乙烯基苯或季戊四醇三丙烯酸酯；所述引发剂为偶氮二异丁腈；所述致孔剂为二氯甲烷、氯仿、乙腈、甲醇、异丙醇、四氯化碳、N，N-二甲基酰胺或二甲基亚砜；所述有机溶剂为二氯甲烷或四氯化碳。

4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述纳米溶液为碳纳米管溶液、纳米金溶液或纳米铂溶液。

5.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述将纳米材料和糖基功能化分子印迹聚合物修饰到玻璃管柱内表面包括以下步骤：

(1)选用长度为5-10cm，直径为2-10mm的玻璃管柱，依次用1mol/L HNO₃和1mol/LNaOH清洗，然后用双蒸水彻底清洗数次，吹干；

(2)将制备的纳米溶液超声处理20-60min，得到分散的纳米溶液；

(3)将分散的纳米溶液注入玻璃管柱内，填满，将玻璃管柱两端封闭，浸泡5-10min，排出管内的纳米溶液，将玻璃管柱在室温下晾干；

(4)向步骤(3)中晾干的玻璃管柱中再注入糖基功能化分子印迹聚合物溶液，填满，将玻璃管柱两端封闭，浸泡5-10min，然后将玻璃管柱中的分子印迹聚合物溶液排出，用洗脱剂洗脱20-30min，室温下干燥5-10min；

(5)重复步骤(3)和步骤(4)过程4-7次，制得所述糖基功能化分子印迹柱。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：还包括以下步骤：将糖基功能化分子印迹柱浸入pH6.8-7.2缓冲液中，保存在4℃冰箱，12～24h后使用。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述洗脱剂为乙腈、水、甲醇-乙酸混合液或乙腈-乙酸混合液。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述缓冲液为柠檬酸-磷酸溶液。

9.一种检测痕量细菌毒素的方法，其特征在于：将按权利要求1至8所述的任意一种方法制得的糖基功能化分子印迹柱连接到化学发光分析仪，将化学发光体系溶液与样品溶液分别泵入化学发光分析仪，对样品中的细菌毒素进行检测。

10.根据权利要求9所述的检测痕量细菌毒素的方法，其特征在于：所述化学发光体系溶液为鲁米诺溶液、光泽精溶液、N-溴代丁二酰亚胺溶液、Ce(IV)-SO₃^2-溶液、鲁米诺-KMnO₄溶液、鲁米诺-H₂O₂溶液、异烟肼-NaClO溶液或NaIO₄-H₂O₂溶液。