[发明专利]一种组织工程人角膜内皮的重建方法

权利要求书

1.一种组织工程人角膜内皮的重建方法，首先利用含20％小牛血清的DMEM/F12培养液对人角膜内皮细胞进行扩增培养，经0.25％胰蛋白酶溶液消化和1000～1500转/分离心10～15分钟获得人角膜内皮细胞沉淀，用DMEM/F12培养液、20％小牛血清和0.05％～0.1％IV型胶原蛋白组成的组织工程人角膜内皮重建专用培养液将该细胞沉淀悬浮成人角膜内皮细胞悬液；然后，利用0.25％胰蛋白酶对冻干羊膜的上皮面进行倒置消化以制备完全脱去上皮层的羊膜，并用打孔器将该脱上皮层羊膜打成与培养板孔直径相同的羊膜圆片；最后，按上皮面朝上将脱上皮层羊膜圆片平铺于48孔培养板孔的底部，放在37℃培养箱中干贴牢固后制成羊膜载体支架，将上述人角膜内皮细胞悬液0.1～0.2毫升接种在平铺有上述羊膜载体支架的培养板中，待人角膜内皮细胞全部贴附在上述羊膜载体支架上后，再补加上述专用培养液并使液面达到培养孔高度的3/4，待人角膜内皮细胞在羊膜载体支架上长成单层即为重建的组织工程人角膜内皮。

2.如权利要求1所述的组织工程人角膜内皮的重建方法，其特征是所述组织工程人角膜内皮重建专用培养液中又添加了0.05％～0.1％纤连蛋白。

3.如权利要求1所述的组织工程人角膜内皮的重建方法，其特征在于上述扩增培养方法是将人角膜内皮细胞扩增培养至对数生长期。

4.如权利要求3所述的组织工程人角膜内皮的重建方法，其特征是上述已达到对数生长期的人角膜内皮细胞的浓度为4.2×10⁶～4.2×10⁷个细胞/毫升。