[发明专利]一种利用分子标记淘汰辣椒感疫病育种材料的方法

权利要求书

1.一种利用分子标记淘汰辣椒感疫病育种材料的方法，其特征在于，具体过程包括如下步骤：

(1)将抗疫病性未知的辣椒育种材料播种于育苗盘进行常规管理，待幼苗长至3～4片真叶时，用改良SDS法分别提取不同育种材料幼嫩叶片的基因组DNA；

(2)以上述幼嫩叶片的基因组DNA为模板，利用分子标记的正反向引物进行PCR扩增反应；

分子标记的正向引物的核苷酸序列为：5’-ctgtgatatggaaggggaacc-3’，反向引物的核苷酸序列为5’-aactcgctgggaaaagaatg-3’

(3)PCR扩增产物在1.2％琼脂糖凝胶上进行电泳分离，溴化乙锭染色，利用凝胶成像系统观察、记录电泳结果；

(4)对电泳结果进行如下判定：

若电泳结果显示能扩增出一条长度为990bp的特征条带，说明该育种材料为感疫病辣椒育种材料，将其淘汰；

若电泳结果显示不能扩增出一条长度为990bp的特征条带，说明该育种材料为抗疫病辣椒育种材料。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中PCR扩增反应的总体积为25μL，其中含1×扩增Buffer，10ng～25ng模板DNA，2.0mmol/L MgCl₂，0.4μmol/L的正向引物，0.4μmol/L的反向引物，0.2mmol/LdNTPs，0.5U Taq DNA聚合酶。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中PCR扩增反应的程序为：95℃预变性5min，再进入PCR循环，循环程序为94℃变性1min，54℃退火1min，72℃延伸1.5min，共进行34个循环，最后在72℃下延伸10min，4℃保存。