[发明专利]一种用于肿瘤病理诊断用途的免疫组织化学诊断试剂盒

权利要求书

1.一种用于肿瘤病理诊断用途的HAb18G/CD147癌标志物的免疫组织化学 诊断试剂盒，临床应用于上皮源性恶性肿瘤的辅助诊断或鉴别诊断， 其特征在于，该试剂盒的内容物包括：

1）用于去除人组织切片中内源性酶的阻断剂，该阻断剂是由浓度为3 %的过氧化氢溶液和浓度为80%的甲醇溶液组成；

2）用于封闭人组织切片中交叉蛋白反应非特异性染色的非特异性蛋白 封闭剂；该封闭剂是由3-5%正常动物血清与磷酸盐缓冲液配制而成；

所述的人组织切片为石蜡切片和冰冻切片；

3）与人体癌组织中HAb18G/CD147癌标志物结合的第一抗体；该第一抗 体是特异性结合HAb18G/CD147癌标志物的鼠源性单克隆抗体，其使用 浓度为10-100μg/mL；

所述的第一抗体在10-100μg/mL浓度的抗体保存液中保存，该抗体保 存液包括有1%牛血清白蛋白、0.1%胶原、0.01mol/L磷酸盐缓冲液、0 .05% NaN₃，该抗体保存液能够维持第一抗体在2-8℃下保存24个月；

4）能与第一抗体结合的第二抗体；该第二抗体是生物素标记的羊或兔 抗小鼠IgG的多克隆抗体；

5）用来结合第二抗体上生物素的酶标链霉亲和素；该酶标链霉亲和素 是辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素，为显色底物；

6）与显色底物作用的显色试剂，该显色试剂是联苯二胺（DAB）溶液 、三羟甲基氨基甲烷（Tris·Hcl）缓冲液和去离子水配制而成，以上 三种试剂的配制用量体积比为1:1:50；

7）试剂盒所用的缓冲体系为，磷酸盐缓冲液Na₂HPO₄-NaH₂PO₄-NaCl， 浓度为0.01mol/L，pH为7.2~7.45。

2.权利要求1所述的用于肿瘤病理诊断用途的HAb18G/CD147癌标志 物的免疫组织化学诊断试剂盒在多种癌组织的染色方法，其特征在于 ，包括：

人组织切片用水化后，加适量的内源性酶阻断剂，反应10分钟，磷酸 盐缓冲液清洗；滴加非特异性蛋白封闭剂1~2滴，反应10分钟；滴加第 一抗体1~2滴，37℃反应2小时，磷酸盐缓冲液清洗；滴加第二抗体1~ 2滴，22-28℃反应20分钟，磷酸盐缓冲液清洗；滴加酶标链酶亲和素 1~2滴，22-28℃反应15分钟，磷酸盐缓冲液清洗；滴加新鲜配制的显 色试剂1~2滴，22-28℃反应1~10分钟，磷酸盐缓冲液清洗；苏木素染 核，梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片、光学显微镜观察； 上述磷酸盐缓冲液清洗为每次3遍，震荡清洗5分钟。