[发明专利]一种包含hBD3乳腺特异性表达载体的重组牛胎儿成纤维细胞

权利要求书

1.一种hBD3乳腺特异性表达载体，包含目的基因hBD3，其特征在于，分别在hBD3基因的5′端插入如SEQ.ID.NO.2所示的序列，3′端插入如SEQ.ID.NO.3所示的序列，作为调控元件；

将包含hBD3基因和调控元件的片段通过SacI、SalI双酶切位点克隆到载体pEGFP-C1上，获得hBD3乳腺特异性表达载体：pEBB表达载体。

2.一种包含目的基因hBD3的牛胎儿成纤维细胞，其特征在于，宿主细胞为牛胎儿成纤维细胞，通过转染外源性表达载体pEBB，将目的基因hBD3整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组；

所述的表达载体pEBB是将包含hBD3基因和调控元件的片段通过SacI、SalI双酶切位点克隆到载体pEGFP-C1上；

所述的调控元件为：分别在hBD3基因的5′端插入如SEQ.ID.NO.2所示的序列，3′端插入如SEQ.ID.NO.3所示的序列。

3.如权利要求2所述的包含目的基因hBD3的牛胎儿成纤维细胞，其特征在于，所述的宿主细胞为1-3代的牛胎儿成纤维细胞。

4.如权利要求2所述的包含目的基因hBD3的牛胎儿成纤维细胞，其特征在于，牛胎儿成纤维细胞通过脂质体法转染外源性表达载体pEBB。

5.如权利要求2所述的包含目的基因hBD3的牛胎儿成纤维细胞，其特征在于，所述牛胎儿成纤维细胞为包含目的基因hBD3的荷斯坦奶牛胎儿成纤维细胞，该细胞保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：C200939。

6.权利要求2所述的包含目的基因hBD3的牛胎儿成纤维细胞作为核移植构建转基因克隆胚的核供体细胞的应用。