[发明专利]一种制备可生物降解组织工程用仿生人工骨材料的方法

权利要求书

1.一种制备可生物降解组织工程用仿生人工骨材料的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)  将类人胶原蛋白用蒸馏水溶解成1%～5%的溶液；

2)  制备羟基磷灰石混悬液； 

3)  将羟基磷灰石混悬液加至类人胶原蛋白溶液中，用NaOH溶液调至溶液pH至7.0，加入0.1-1%的京尼平4℃交联，真空冷冻干燥制得类人胶原蛋白与纳米羟基磷灰石质量比为（0.25~4）：1的类人胶原蛋白/羟基磷灰石粉末；京尼平水溶液占混合溶液的0.5%～1%；

4)  将分子量为400,000～600,000Da壳聚糖用稀酸溶解成0.01%～0.04%的溶液；

5)  将类人胶原蛋白/羟基磷灰石粉末加至壳聚糖溶液中，用NaOH溶液调至溶液pH至7.0，重复加入1%～5%的类人胶原蛋白溶液和0.01%～0.04%壳聚糖溶液，然后加入0.1-1%的京尼平溶液交联1-3d，使得壳聚糖溶液的总量占终溶液的1%～4%；京尼平水溶液占混合溶液的0.5%～1%；

6)  将上述混合溶液真空冷冻干燥；

7)  将细胞密度为5×10⁴ cells/cm²的BMSCs接种于步骤6）材料上；

培养1-10d后，换诱导培养基培养BMSCs细胞，诱导其向成骨方向分化，最终形成具有诱导骨活性的骨修复复合材料。

2.根据权利要求1所述制备可生物降解组织工程用仿生人工骨材料的方法，其特征在于：所用的类人胶原蛋白为使用基因重组大肠杆菌高密度发酵生产的一种人源型胶原蛋白。

3.根据权利要求1所述制备可生物降解组织工程用仿生人工骨材料的方法，其特征在于羟基磷灰石混悬液使用以下方法制备：Ca(NO₃)₂溶液与(NH₄)₃PO₄溶液反应，反应体系的pH值用NH₃·H₂O 调节使其保持pH 9±0.1。

4.根据权利要求1所述制备可生物降解组织工程用仿生人工骨材料的方法，其特征在于：所述稀酸为稀磷酸、稀醋酸、稀甲酸或稀丙酸中任意一种。

5.根据权利要求1所述制备可生物降解的组织工程用仿生人工骨材料的方法，其特征在于：步骤6）中，预冷温度在-20℃～-196℃。