[发明专利]海雀稗体细胞60Co r射线辐射诱变方法

说明书

技术领域

本发明海雀稗体细胞⁶⁰Cor射线辐射诱变方法，涉及一种适用于植物细胞离体培养植株再生和⁶⁰Cor射线辐射诱变技术，属于植物培养方法技术领域。

背景技术

海雀稗(Paspalum vaginatum Sw.)作为草坪草，在世界热带与亚热带地区广为种植，是继狗牙根、结缕草和假俭草等暖季型禾草之后兴起的后起之秀(解新明，卢小良.海雀稗种质资源的优良特性及其利用价值[J]，华南农业大学学报，2004，25(增刊II)：64～67)。三倍体的海雀稗因花粉败育、自交不亲和等障碍(马国华，赵南先.雀稗属细胞学和繁殖生物学研究[J]，亚热带植物科学，2003，32(3)：5～9)，给常规育种工作带来困难。

自20世纪50年代后期，我国开始进行植物辐射诱变育种技术的研究；60年代后期，在农作物新品种选育上获得成功；70年代后期，大批优良农作物新品种陆续育成，并在农业生产中开始大面积推广应用(王志东.我国辐射诱变育种的现状分析[J]，同位素，2005，18(3)：183～185)。

辐射诱变在杂交狗牙根、扁穗纯叶草、假俭草、草地早熟禾、狗牙根、高羊茅等草坪草育种中也得到应用(程金水主编.园林植物遗传育种学.北京：中国林业出版社，2000，5：153-170)。已报道的草坪草辐射诱变的研究材料多为种子或匍匐茎，辐射源以⁶⁰Cor射线为主(王丹，任少雄，苏军，等.核技术在观赏植物诱变育种上的应用[J]，核农学报，2004，18(6)：443-447)。迄今为止，在草坪草上国内外仅有1篇以匐匍翦股颖的愈伤组织为材料，⁶⁰Cor辐照剂量为20Gy，获得抗旱的变异体植株报道(周小梅，赵运林，周朴华，等.匐匍翦股颖L-93抗旱变异体的离体筛选与鉴定[J].草业学报，2007，16(5)：121-126)。

发明内容

技术问题本发明要解决的技术问题和提出的技术任务是以海雀稗的颗粒状胚性愈伤组织为材料，以⁶⁰Cor射线为辐射源，研究不同剂量的⁶⁰Cor射线对愈伤组织生长、分化和植株再生的影响，运用离体培养方法从突变细胞再生出植株，建立海雀稗体细胞⁶⁰Cor射线辐射诱变方法。

技术方案

海雀稗体细胞⁶⁰Cor射线辐射诱变方法，包括：

1)材料

选用海雀稗的颗粒状胚性愈伤组织为材料，⁶⁰Cor射线为辐射源；

2)培养基

基本培养基由MS大量元素、MS微量元素与B₅维生素组成，添加蔗糖30g/L；

愈伤组织继代培养基：附加2，4-二氯苯氧乙酸2.0mg/L，6-苄基氨基嘌呤0.05mg/L，琼脂条16g/L；

愈伤组织分化培养基：添加6-苄基氨基嘌呤2.0mg/L，琼脂条8g/L；

生根培养基：附加萘乙酸0.5mg/L，琼脂条8g/L；

上述各种培养基在高压灭菌前用氢氧化钠和盐酸调整pH值至5.8；

3)方法

选择颗粒状胚性愈伤组织在愈伤组织继代培养基上进行增殖培养，用作辐射处理材料。⁶⁰Cor射线的剂量率为1Gy/min，辐照剂量设置分别为60Gy、70Gy或80Gy，其中60Gy或70Gy辐照10min，80Gy辐照20min。经过辐射诱变处理的愈伤组织转移到愈伤组织分化培养基上，在光照条件下培养，21d左右分化产生绿芽；绿芽先转移到愈伤组织分化培养基上培养25d，然后再转移到生根培养基上培养，21d左右形成具有根、茎、叶的完整再生植株。

离体培养条件：培养室温度为26±2℃，光照强度为1500lx，光照时间为16h/d。

有益效果本发明与现有技术相比具有如下优点和积极效果：

本发明克服现有植物辐射诱变方法主要是以植物的整体植株或不同部位的组织、器官等为材料，辐射诱变获得的往往是隐性突变体和嵌合体的缺陷。在离体培养条件下，选用具有高频率植株再生能力的颗粒状胚性愈伤组织为材料，进行⁶⁰Cor射线辐照处理，从经过辐射处理的细胞再生出植株，有利得到诱变纯合体，减少诱变中嵌合体，提高辐射诱变的育种效率。本发明建立的海雀稗体细胞⁶⁰Cor射线辐射诱变方法适宜用于植物新品种开发，如体细胞突变体筛选，为在细胞水平上开展植物细胞辐射诱变育种提供条件。