[发明专利]一种短小芽孢杆菌及其在防治杨树溃疡病中的应用

说明书

技术领域

本发明属于植物保护领域，尤其涉及一种短小芽孢杆菌及其在防治杨树溃疡病中的 应用。

背景技术

杨树是重要的速生用材树种，具有颇高的经济价值和生态效益。然而，杨树在生长 过程中不断受到病虫害的威胁。杨树溃疡病是一类危害严重的杨树枝干病害，病原种类 繁多，症状多种多样，很难防治。

目前，杨树溃疡病的防治主要以化学防治和培育抗性品种为主。采用抗病育种的方 法虽然取得一定的效果，但却存在抗性退化、抗性较低等问题；而化学农药的大量使用 又易造成环境污染和生态平衡破坏等。大量研究表明，生物防治在植物病害综合控制中 有着不可替代的作用。

近年来，拮抗细菌以其生长繁殖旺盛、易人工培养等优点受到人们的普遍关注，已 成为生物防治应用的主力军。拮抗细菌是否发挥其生防作用，主要取决于是否能在植物 体上有效定殖。因此，从杨树生态系统中分离筛选对杨树溃疡病原真菌具有拮抗作用的 生防细菌，并进一步利用开展对杨树溃疡病的生物防治，是一种较为理想的控制杨树溃 疡病的方法。

芽孢杆菌(Bacillus spp.)在自然界分布非常广泛，生理特性丰富多样，是土壤和植 物微生态优势种群之一。它们可以产生丰富的具有潜在植物病害防治和医学应用价值的 抗菌物质，是植物病害生防微生物的重要组成部分(Tamenhiro，2002；蒙显英，2004)。 而且芽孢杆菌内生芽孢，繁殖能力强，有利于工业生产，是自然界中广泛存在的非致病 细菌，对人无害，不污染环境。

Mari等(1996)研究发现短小芽孢杆菌(B.pumilus)对某些真菌及病菌具有拮抗作 用，是一种有开发前途的生防菌。目前国外主要将短小芽孢杆菌应用于防治蔬菜的根际 病害，Akhtar等(2008)报道短小芽孢杆菌用于防治鹰嘴豆根腐病有很好的效果；近年 来，我国也有用短小芽孢杆菌防治番茄灰霉病、黄瓜菌核病菌等植物病害的报道(李桂 霞等，2009；于婷等，2009)。但短小芽孢杆菌防治杨树溃疡病国内外未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种高效防治杨树溃疡病的短小芽孢杆菌。

本发明还要解决的一个技术问题是提供上述短小芽孢杆菌的用途。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

高效防治杨树溃疡病的短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)JK-SX001，是一种从杨树 干部筛选获得的对杨树溃疡病菌具有拮抗作用且具有内生性的生防细菌菌株，已保藏于 中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏号M 209026。

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)JK-SX001在牛肉膏蛋白胨培养基平板上菌落较大， 淡黄色，直径一般5～6mm，圆形，边缘整齐，中间有褶皱，光滑湿润，菌体直杆状， 大小为1×(1～2)μm，周生鞭毛。革兰氏染色表现为阳性；淀粉水解阴性；兼性好氧；氧 化酶反应为阴性；过氧化氢酶反应阳性。测得16SrDNA大部分序列1448bp，具体如SEQ ID No：1所示。16SrDNA基因序列已提交GenBank，登记号GQ169785。将所测16SrDNA 序列通过BLAST比对，能在GenBank中找到同源性非常高的相近菌株序列。与 JK-SX001菌株相似性最高的是Bacillus pumilus，同源性达到99％。构建进化树发现， JK-SX001与Bacillus pumilus同属一个遗传分枝，亲缘关系十分接近。

Biolog公司根据细菌代谢的氧化-还原过程，于1989年推出了用于细菌鉴定的Biolog 自动鉴定系统。该系统利用细菌对95种碳源的代谢情况来鉴定菌种，即每种细菌形成 各自特有的代谢指纹图谱，选用四唑紫作为细菌能否利用供试碳源的指示剂。与传统方 法相比，Biolog系统具有自动化和标准化程度高、结果快速准确和操作简便等优点。 Biolog细菌鉴定系统已广泛应用于细菌快速鉴定。通过Biolog系统对JK-SX001进行鉴 定，该菌株在鉴定板培养16～24h时的读数相似值(SIM值)为0.802，大于0.50，符合 Biolog系统关于理想结果的要求，而且鉴定结果的相似性(PROB)都为99％，因此该菌 株利用Biolog系统，准确鉴定到了种，为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。