[发明专利]一种同时检测牛奶中多种酞酸酯的液质联用测定方法

说明书

技术领域

一种同时检测牛奶中多种酞酸酯的液质联用(LC-ESI-MS/MS)测定方法， 具体是一种可同时对牛奶中9种酞酸酯进行定量测定的LC-ESI-MS/MS方法， 属于食品检测技术领域。

背景技术

酞酸酯类化合物(Phthalatic acid esters，PAEs)，多为无色油状粘稠液体， 易溶于脂肪和有机溶剂，难溶于水，不易挥发，含有较弱的雌激素成分，影响 生物体内分泌、导致突变、致畸和癌细胞增殖，是一类环境激素。可通过呼吸、 饮食和皮肤接触进入人体内，对人体健康造成危害。PAEs不仅具有一般毒性， 还具有特殊毒性，如生殖毒性、胚胎毒性和遗传毒性等。PAEs是塑料工业的主 要增塑剂和软化剂，主要用于生产橡胶、塑料、润滑剂、粘合剂、涂料、高分 子助剂、印刷油墨用软化剂及电容器油等，由于它们的兼容性和软化能力，尤 其广泛地应用在软质的聚氯乙烯(PVC)产品中。PAEs可广泛应用于食品包装材 料、容器、医疗用品及人造革等的制造，还可用作农药载体，驱虫剂、化妆品 和香料的调配剂，以及涂料和润滑剂的成分。由于PAEs与塑料基质之间没有形 成化学键，而是以氢键和范德华力连接，接触到合适的有机溶剂便会溶解出来， 对环境、生物和食品造成污染。

PAEs在全球主要工业国的生态环境中已达到了普遍检出的程度。PAEs对环 境的污染已经受到世界各国的普遍重视。其中DMP(邻苯二甲酸二甲酯)，DEP(二 乙酯)，DBP(二丁酯)，BBP(丁基卞基酯)，DNOP(二正辛酯)，DEHP(二-(2-乙 基己基)酯)等已被美国环保局(EPA)列为首选检测污染物。欧盟的1999/815/EU 指令也规定儿童用PVC玩具中含有的DBP，BBP，DEHP，DNOP，DINP(二 异壬酯)，DIDP(二异癸酯)等6种对人体和环境有害的物质，其总检出量必须低 于0.1％。由于PAEs在环境中残留期较长，生物对其具有富集作用，我国也已 将PAEs族系中的邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、邻苯二甲酸二乙酯(DEP)和邻苯 二甲酸二正辛酯(DNOP)确定为环境优先控制的污染物。

目前有关酞酸酯类化合物的检测报道在环境方面比较多，涉及食品方面的 相对较少。大多数食品均采用塑料制品进行内包装或内衬。邻苯二甲酸酯类化 合物能从塑料包装袋中向食品、特别是含油脂食品，如牛奶、肉类中迁移，食 品在塑料包装材料中储存的时间越长，或用于包装食品的塑料材料中增塑剂含 量越高，都会加大增塑剂向食品中迁移的量，即对食品的污染程度越大。

国内在1984年后才陆续出现有关PAEs污染情况的报道，但数量很少。近 十年PAEs的测定方法也逐渐成熟。早期的方法有滴定法、比色法、分光光度法、 薄层色谱法等，但都不够灵敏，选择性都不够好。目前多采用气相色谱法和液 相色谱法，尤其是气质联用和液质联用法。目前基于气质联用的PAEs确证方法 已有报道。但气质联用要进行比较复杂的衍生化处理，因此，液质联用法(LC- ESI-MS/MS)显示出一定的优势。

发明内容

本发明的目的：针对现有检测酞酸酯的技术中只能测定一种或几种酞酸酯 的不足和缺陷，提供一种可有效地检测出牛奶中多种酞酸酯含量的液质联用方 法，该方法旨在将基本包括现有牛奶所可能涉及的各种主要酞酸酯，使其能更 加快速、灵敏、简便地检测酞酸酯残留，以满足实际工作的需要。

本发明的技术方案：本发明建立的液质联用HPLC-ESI-MS/MS测定方法， 经过样品处理、液相分离、质谱检测三个步骤，同时检测牛奶中多种酞酸酯的 含量，包括牛奶中邻苯二甲酸二甲酯、苯二甲酸二乙酯、苯二甲酸二丁酯、苯 二甲酸二戊酯、苯二甲酸二环己酯、苯二甲酸二辛酯、苯二甲酸二异葵酯、苯 二甲酸二异辛酯和苯二甲酸丁基苄基酯等9种酞酸酯类化合物。

(1)样品前处理及提取净化：称取蒙牛液态纯牛奶2g加到50mL的玻璃 离心管中，加入200ng的9种酞酸酯等量混合标准溶液，即加标100ppb，然后 涡旋混匀。再加入10mL的乙腈涡旋，接着再加0.8g NaCl进行涡旋并超声 10min，然后以2000rpm低速离心10min。取上层乙腈清液到另一空的玻璃离 心管中进行真空旋转蒸发至干，然后加入色谱纯的甲醇涡旋溶解旋干物并定容 至1mL，转入至进样瓶进样。

(2)液相分离：

液相条件为：