[发明专利]一种EMB菌的生物制剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种微生物制剂，具体是涉及一种EMB菌的生物制剂，及其制备方法和其在降解和清除微囊藻毒素的应用。

背景技术

近年来，水体富营养化导致大量有害蓝藻水华，其中我国太湖、巢湖、滇池已成为蓝藻爆发的三大水域，2007年太湖水华严重时，恶臭的水质和水体中难以去除的超量藻毒素迫使城市停止供水，给人们的正常生活和饮食安全造成巨大威胁。微囊藻毒素(Microcystins，MCs)是目前已知的淡水水体中含量最大、危害最严重的藻毒素种类，能够抑制生物体内的蛋白磷酸酶1和2A的生物活性，造成生物体急性和慢性毒害。家畜及野生动物饮用了含藻毒素的水后，会出现腹泻、乏力、厌食、呕吐、嗜睡、口眼分泌物增多等症状，甚至会导致中毒死亡。人们在洗澡、游泳及其他水上休闲和运动时，皮肤接触含藻毒素水体可引起眼睛和皮肤过敏，少量喝入可引发急性肠胃炎，长期饮用则可能引发肝癌。医学部门已发现饮水中超标的MCs与人群中原发性肝癌的发病率有很大相关性。为了保障人民的生命安全，世界卫生组织(WHO，1998)推荐饮水中的藻毒素标准为1.0μg/L，我国现行的生活饮用水水质卫生规范(2001，0.001mg/L)和地表水环境质量标准(GB3838-2002。MC-LR，0.001mg/L)也都包含了MCs的限量标准。

其中MCs是一类由7个氨基酸组成的单环七肽，在水中溶解性大于1g/L，不挥发，耐酸碱、耐高温、化学性质稳定，现已发现其由80多种异构体，其中MC-RR和MC-LR是天然水体中检出频率最多和含量最高的MCs类型。在水中MCs自然降解过程十分缓慢，且MCs有很高的耐热性，加热煮沸都不能将其破坏，也不能将其去除，一般的自来水处理工艺的混凝沉淀、过滤、加氯也不能将其去除。目前，已被证实能去除MCs的方法主要有活性碳吸附、TiO₂催化光氧化、臭氧氧化、生物降解等，目前已发现铜绿假单胞菌、鞘氨醇单胞菌和Ralstoniasolanacearum菌种对MC-RR和MC-LR这两种类型的MCs有降解能力，但目前去除藻毒素MCs的方法效率较低，成本较高，操作不方便。

发明内容：

发明目的：本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种能有效、快速降解和清除水中微囊藻毒素的EMB菌微生物制剂，本发明另一个目的是提供该EMB菌微生物制剂的制备方法和其在降解和清除水中微囊藻毒素中的应用。

技术方案：为了实现以上目的，本发明提供的EMB菌的生物制剂，它由以下方法制备得到：

①摇瓶富集培养：选取枯草芽孢杆菌Bacillus subtilus的EMB菌株，接种至培养基中，以120转/min，30℃下震荡培养1至3天，得到EMB菌培养液；

②取步骤①得到的EMB菌培养液，按EMB菌培养液和发酵培养基体积比1∶10至1∶20，把EMB菌培养液转入细菌发酵培养基中，以120转/min，30℃下继续培养3至5天，得到EMB菌的发酵液；

③取步骤②得到的EMB菌的发酵液，以5000～8000转/min，离心10～30min，取上层菌液，备用；

④取步骤③得到的上层菌液和药学上可接受的载体制备得到EMB菌的发酵菌液制剂。

本发明提供的EMB菌的生物制剂，可以取骤③离心得到的下层EMB菌体，将EMB菌体悬浮于浓度为0.3％～0.6％的NaCl溶液中，分装即得。也可以将菌体悬浮于浓度0.3％～0.6％的NaCl溶液中之后再加入等体积的甘油，制备得到EMB菌的生物制剂。