[发明专利]甲醛测定试剂(盒)及甲醛浓度测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种甲醛测定试剂(盒)，同时本发明还涉及测定甲醛浓度的方法，属于食品/环境检验测定技术领域。

背景技术

甲醛测定的测定方法主要有分光光度法、色谱法、电化学法、化学滴定法等：分光光度法测定的主要方法有乙酰丙酮法、铬变酸法、MBTH法、付品红法、AHMT法等几种。分光光度法的优点是操作简便；；缺点是灵敏度较低，有污染介质，对测定有干扰。

色谱法主要有气相色谱、高效液相色谱法、离子色谱法等，直接利用色谱法较少，一般是和其它分析仪器相连用，如GC-MS、HPLC-UV等。色谱法方法简单、快速、直接，但是操作繁琐、试剂消耗量大、方法选择性差等缺点。

电化学法包括示波极谱法、吸附伏安法和哥腊衍生试剂法，该法空气中甲醛的灵敏度和准确度都很高，适合于测定室内空气中微量甲醛。

荧光分析法因具有快速、简便、灵敏度高、重现性好等优点而受到人们广泛的重视，尤其是用于室内空气环境中痕量甲醛的分析监测，其优点更为突出。化学发光分析法具有灵敏度高，线性范围宽，仪器设备简单等优点。

化学滴定法主要包括电位滴定法、碘量法及酸碱滴定法。

综合上述，没有一个方法可以使用自动化仪器检测甲醛的，酶法检测甲醛的试剂，酶法的优点是特异性高不受干扰、操作方便、成本低廉、可以大批量检测，方法灵敏。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提出一种利用酶三倍扩增法(EnzymaticTribling Method)、酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)及酶(偶)联法(Couple Reaction)技术，计量还原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶)在340nm波长处吸光度的变化，得以测定甲醛浓度的方法，同时，本发明还将给出用以实现该方法的甲醛测定试剂(盒)，采用该试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行甲醛浓度测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。

本发明甲醛浓度测定方法如下：

甲醛+辅酶+水 甲醛脱氢酶 甲酸+还原型辅酶

甲酸+乙醛 乳酸醛缩酶 乳酸

乳酸+辅酶 乳酸脱氢酶 丙酮酸+还原型辅酶

丙酮酸+辅酶A+辅酶 丙酮酸脱氢酶 二氧化碳+乙酰辅酶A+还原型辅酶

这种方法应用甲醛脱氢酶(formaldehyde dehydrogenase；EC 1.2.1.46)酶(偶)联乳酸醛缩酶(lactate aldolase；EC 4.1.2.36)、乳酸脱氢酶(LactateDehydrogenase；EC 1.1.1.27；EC 1.1.1.28；EC 1.1.2.3)、丙酮酸脱氢酶(pyruvatedehydrogenase；EC 1.2.1.51)酶促反应比色终点法。甲醛脱氢酶酶解甲醛反应产生甲酸，再通过(偶)联合乳酸醛缩酶、乳酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶的作用，最终将辅酶(在340nm处没有吸收峰)还原成为还原型辅酶(在340nm处有吸收峰)，从而得以测定还原型辅酶在340nm处吸光度上升的程度，通过测量340nm处吸光度上升的程度，可以测算甲醛的浓度大小。

实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，无论是单剂、双剂还是三剂，如下成分关系的本发明甲醛测定试剂(盒)较为理想：

缓冲液                                100mmol/L

稳定剂                                500mmol/L

辅酶                                  3mmol/L

甲醛脱氢酶                            10000U/L

乳酸醛缩酶                            12000U/L

乳酸脱氢酶                            12000U/L

丙酮酸脱氢酶                          12000U/L

乙醛                                  9mmol/L

辅酶A                                 3mmol/L