[发明专利]棉花花粉管微丝骨架的荧光标记方法

权利要求书

1.一种棉花花粉管微丝骨架的荧光标记方法，包括以下步骤：

1)载玻片打孔

将25.5×76.2mm，1mm-1.2mm厚的载玻片中间用电钻打出直径为1cm的圆 孔，其中将孔一边用盖玻片封住，形成小室，粘附剂为指甲油；

2)培养花粉管

晴天上午收集刚开放花朵上的花粉，使其充分混合；将花粉洒在半固体培养 基表面，半固体培养基质量比成分：0.01％硼酸、0.03％四水硝酸钙、0.02％七 水硫酸镁、15％聚乙二醇8000、20％蔗糖和1％低熔点琼脂糖，pH6.2，28℃光 照培养2-3h；

3)荧光标记

培养好的花粉管用含有质量百分浓度4％多聚甲醛、pH为6.9的50mM Pipes 缓冲液室温条件下固定1-2h；用Pipes缓冲液洗涤花粉管；将花粉管置于体积比 为0.1-0.2％的甘油或体积比为0.1-0.2％浓度的Triton X-100中室温渗透3-4h 或4℃冰箱过夜；用pH7-9的磷酸缓冲液洗涤花粉管；花粉管用浓度为1-2.5μg/ml 的罗丹明TRITC标记的鬼笔环肽避光染色2-4h，微丝骨架被荧光标记；用pH7-9 的磷酸缓冲液洗涤花粉管；荧光标记过的花粉管在共聚焦扫描显微镜下观察。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述棉花为陆地棉。