[发明专利]一种基于RT-LAMP技术的H3亚型流感快速检测分型方法

权利要求书

1、一种基于RT-LAMP技术的H3亚型流感快速检测分型方法，它包括以下 步骤：

步骤一，检索流感病毒基因组序列数据库，对流感病毒基因组序列数据库 中H3亚型流感病毒的HA基因序列进行序列分析，设计出6条高特异的、高度 保守的RT-LAMP专用引物针对靶基因的8个区域，其中4条引物针对靶基因的 6个区域，这4条引物为FIP、BIP，F3和B3，其余2条为loop引物LP1，LP2， loop引物LP1，LP2针对靶基因的2个区域；

步骤二，收取待检样本进行预处理，然后从预处理后的待检样本中提取总 RNA作为反应模板，总RNA在低温条件下进行保存待用；

步骤三，配置RT-LAMP反应体系，首先在反应管中依次加入反应buffer， dNTPs，然后再加入LAMP专用引物FIP、BIP、F3、B3、LP1和LP2，逆转录酶和 DNA扩增酶；

步骤四，将步骤二中总RNA反应模板混入步骤三所配制的RT-LAMP反应体 系置于水浴中，恒温条件下进行RT-LAMP扩增；

步骤五，将步骤四中扩增后的反应产物进行判定，呈阳性则表示样本中含 有H3亚型流感病毒，呈阴性则表示不含有H3亚型流感病毒。

2、根据权利要求1中所述的基于RT-LAMP技术的H 3亚型流感快速检测分 型方法，其特征是步骤二中采用Trizol法或总RNA提取试剂盒来提取待检样本 的总RNA。

3、根据权利要求1中所述的基于RT-LAMP技术的H3亚型流感快速检测分 型方法，其特征是步骤一中各引物的序列表为：

  序号   引物名   序列(5’→3’)   1   FIP   GCTTCCATTTGGAGTGATGCATTCCGAAGTGGGAAAAGCTCAAT   2   BIP   GTAAACAGGATCACATATGGGGCGCATCCCTGTTGCCARTT   3   F3   AATTGCTCCTCGGGGTTA   4   B3   CCGAATATGCCTCTAGTTTG

  5   LP1   GCCAATGGGTGCATCTGAC   6   LP2   GTCCCAGATATGTTAAGCAAAACAC