[发明专利]海洋细菌交替假单胞菌LP621产右旋糖苷酶的方法及产品

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用从中国黄海连云港海域的海水中分离得到的交替假单胞菌LP621(Pseudoalteromonas sp.LP621)产右旋糖苷酶的方法与产品。

背景技术

右旋糖苷(Dextean)(a homoglycan of D-glucopyranose)是95％为α-1，6糖苷键的多糖。右旋糖苷酶(Dextranase，α-D-1，6-Glucan-6-D-Glucanohydrolase，EC3.2.1.11)，又叫α-葡聚糖酶，是专一切割右旋糖苷(Dextean)中α-1，6糖苷键的水解酶(Khalikova et al.，2003)。右旋糖苷酶有很重要的应用价值，在龋齿防治、制糖工业和药用右旋糖苷的生产等方面发挥着越来越重要的作用(Khalikova et al.，2005)。

右旋糖苷酶在龋齿防治中的应用。口腔中的细菌发酵食物中的蔗糖，生成水溶性右旋糖苷。这些水溶性右旋糖苷在牙齿面形成牙菌斑，一些乳酸菌在此大量繁殖并分泌出一些酸性物质，破坏牙釉质，从而导致龋齿。牙菌斑是龋齿和牙周病重要的致病因素之一。因此为了预防和控制龋齿和牙周病，抑制牙菌斑的发生和发展至关重要。利用右旋糖苷酶能有效抑制牙菌斑形成(Marotta et al.，2002；Mehvar et al.，2000；Banas et al，.2003)。右旋糖苷酶是一种生物制剂，使用和保存简便易行。无毒性，无耐药性，不影响口腔内的菌群的生态平衡，对不会刷牙的婴幼儿和不具备洗漱条件的情况下，是一种良好的预防牙龋齿斑的制剂。而每个人饭后，尤其是食用糖后应用添加有此酶的漱口剂，是一项很好的抑制菌斑形成，预防龋齿和牙周病的有效措施。近几年各国在这一领域已作了深入研究，将具有降解菌齿斑能力的右旋糖苷酶添加到牙膏、漱口水和口香糖中，取得了良好的防治龋齿的效果。

右旋糖苷酶在制糖工业中的应用。由于微生物的污染，甘蔗在收割、运输、储藏、压榨过程中，蔗糖会转化成右旋糖苷，呈粘性。粘性的右旋糖苷对制糖工业的影响是不利的。它不仅消耗了蔗糖分子降低了收率，而且右旋糖苷的存在，造成甘蔗汁黏度增加，对沉淀过滤甚至传热带来不良影响，使煮糖时间增加，废蜜的提净率降低，助晶分离困难，增加了能耗。严重时，会导致管道不畅，迫使停机清扫。在甘蔗压榨过程中加入适量的右旋糖苷酶使右旋糖苷降解，可以解决上述问题(Egglestona et al.，2005；Jime′nez 2005)。

右旋糖苷酶在药用右旋糖苷生产中的应用。医药工业上，右旋糖苷主要用作血浆增量剂，即代血浆。目前医药上用的右旋糖苷有中分子量和低分子量两种，中分子量限于70000左右，低分子量的为40000。目前，药用右旋糖苷的生产主要是采用酸水解法，条件激烈，得率低，要求生产设备条件苛刻，如能采用酶法生产，可提高产率，降低成本(程秀兰等，1992)。

目前国内外报道的产生右旋糖苷酶微生物主要为青霉(Penicillium)、斯达油脂酵母(Lipomyces starkeyi)、曲霉(Aspergillus)、链球菌(Streptococcus)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)(Khalikova et al.，2005)。Korpela等从土壤中筛选到一株能产生热稳定胞外右旋糖苷酶的芽孢杆菌，并对该酶进行了纯化(Khalikova et al.，2003)。Lgarashi等将大鼠链球菌(Streptococcus rattus)右旋糖苷酶在大肠杆菌中表达，重组酶与那些来自的变形链球菌(Streptococcus mutants)和远缘链球菌(Streptococcus sobrinus)的右旋糖苷酶具有相似的性质如最适pH和最适温度(Lgarashi et al.，2004)。Doman Kim等报道斯达油脂酵母(L.starkeyi)的右旋糖苷酶在S.cerevisiae中表达(Kang etal.，2005)。Roca等将(Penicillium minioluteum)右旋糖苷酶在(毕赤酵母Pichiapastoris Muts)中表达(Roca et al.，1996)。国内仅见对淡紫拟青霉和焦曲霉产右旋糖苷酶以及斯达油脂酵母的右旋糖苷酶的研究(程秀兰等，1992；Chen etal.，2008)。国内外对海洋细菌交替假单胞菌属(Pseudoalteromonas)产右旋糖苷酶的研究尚未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种新的利用交替假单胞菌LP621产右旋糖苷酶的方法。