[发明专利]一种氯氟氰菊酯人工抗原及其合成方法

权利要求书

1、一种氯氟氰菊酯半抗原，其特征在于：

化学名称为α-氰基-3-(4-氨基苯氧基)苄基-3-(2-氯-3，3，3-三氟-1-丙烯基)-2，2-二甲基环丙烷羧酸酯，简写为CY。

2、一种氯氟氰菊酯人工抗原，其特征在于：用权利要求1所述的氯氟氰菊酯半抗原与牛血清白蛋白偶联制得的产品，化学名称为α-氰基-3-(4-氨基苯氧基)苄基-3-(2-氯-3，3，3-三氟-1-丙烯基)-2，2-二甲基环丙烷羧酸酯-牛血清白蛋白，简写为CY-BSA。

3、一种权利要求2所述氯氟氰菊酯人工抗原的合成方法，其特征是以氯氟氰菊酯为原料，依次通过硝化反应、还原反应，成功合成带有活性基团-NH₂的半抗原CY，半抗原CY通过重氮化法与牛血清白蛋白偶联制得氯氟氰菊酯人工抗原CY-BSA，步骤为：

1)、α-氰基-3-(4-硝基苯氧基)苄基-3-(2-氯-3，3，3-三氟-1-丙烯基)-2，2-二甲基环丙烷羧酸酯的合成：

向150mL的三口烧瓶中加入18g氯氟氰菊酯，30mL乙酸酐搅拌溶解，滴加2mL发烟硝酸与10mL乙酸的混合液，滴加完毕，室温继续搅拌反应3.5h；

将反应液倒入冰水中，搅拌，出现大量黄白色粘稠物质，用乙酸乙酯对水液进行萃取，收集有机相，无水Na₂SO₄干燥过夜，抽滤，减压蒸馏得金黄色粘稠液体，经过硅胶柱层析脱色纯化得无色透明油状化合物；

2)、半抗原CY的合成：

称取上步得到的产物4g，溶于50mL乙醇中，加入9.8g SnCl₂·2H₂O搅拌得白色的浊液，N₂保护反应，70-75℃下反应35min；

反应液冷却后，倒入水中，搅拌加入乙酸乙酯，用NaHCO₃溶液调节pH7，抽滤，蒸馏水、乙酸乙酯依次洗涤滤饼，收集滤液中的有机相，无水Na₂SO₄干燥，抽滤，减压蒸馏得红褐色的油状物，通过硅胶柱层析脱色纯化得红棕色的油状化合物；即α-氰基-3-(4-氨基苯氧基)苄基-3-(2-氯-3，3，3-三氟-1-丙烯基)-2，2-二甲基环丙烷羧酸酯，半抗原CY；

3)、人工抗原CY-BSA的制备：

称取上步合成的半抗原CY23.2mg于50mL的烧瓶中，加入4mL DMF溶解，再加入0.5M的HCl溶液1mL和0.1M的NaNO₂溶液0.6mL，4℃下搅拌反应30min，加入1.8mg尿素，继续搅拌5min，得氯氟氰菊酯半抗原重氮化组分；

称取90mg牛血清白蛋白溶解于20mL 0.2M、pH8.7的硼酸盐缓冲溶液中，4℃下将制备的重氮化组分逐滴加入到牛血清白蛋白溶液中，搅拌12h，之后将偶联液装入透析袋中，4℃下，于0.01M、pH7.5的PBS缓冲溶液中搅拌透析，每天换3次透析液，共透析4-6天，透析结束后将透析袋中乳状液分装于1mL的离心管中，于-20℃冰箱中存放备用，即为氯氟氰菊酯人工抗原α-氰基-3-(4-氨基苯氧基)苄基-3-(2-氯-3，3，3-三氟-1-丙烯基)-2，2-二甲基环丙烷羧酸酯-牛血清白蛋白，人工抗原CY-BSA。

4、根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于所述的牛血清白蛋白可改用卵清蛋白。