[发明专利]高效液相色谱法分析分离非布司他及其中间体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及非布司他分离与分析方法，尤其是一种高效液相色谱法。

背景技术

非布司他(化学名：2-[3-氰基-4-(2-甲基丙氧基)苯基]-4-甲基-5-噻唑甲酸)为新一代非嘌呤类黄嘌呤氧化酶抑制剂，临床上用于已出现尿酸沉积(包括痛风石、痛风性关节炎)的慢性高尿酸血症的治疗。其结构式为：

在其合成的过程当中可能会引入下列几个中间体：

对于合成非布司他的过程中引入的中间体杂质，不论是在原料药还是制剂中都是需要进行严格控制的，所以发现一种非布司他及其中间体分析分离的方法具有现实意义。

申请人发现，用以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱(C18(250×4.6mm，5μm))，采用0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至3.0)-(甲醇-四氢呋喃)(80∶20)＝25∶75为流动相，可以将非布司他及其杂质快速有效的分离，很好的控制非布司他及其制剂的质量。本发明的方法能简单、快速、准确地分析非布司他的纯度和含量并能有效的控制中间体杂质。

发明内容

本发明提供了一种快速分析分离非布司他及其中间体杂质的高效液相色谱法，从而实现了非布司他及其中间体杂质的分离测定。

本发明所说的用高效液相色谱法分离与分析非布司他及其中间体杂质的方法，是选择以氨基键合硅胶或烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，以一定比例的有机相-缓冲液为流动相。

上述所说的以氨基键合硅胶或烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，优选十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱。

本发明的流动相中的有机相选自甲醇、乙腈、四氢呋喃，优选甲醇、四氢呋喃。

本发明的流动相，有机相-缓冲液的的比例为15∶85～35∶65，优选25∶75。

本发明的流动相中所选用的缓冲液选自磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液，优选磷酸盐缓冲液，最优选磷酸二氢钾缓冲液，缓冲液的浓度范围为0.01mol/L～0.05mol/L，优选0.01mol/L。

本发明所述的分析分离方法，可以依照以下方法实现：

(1)取待处理样品适量，用甲醇-四氢呋喃(4∶1)溶解，配制成每1ml中含0.1mg的混合样品溶液。

(2)设置流动相流速为1.0mL/min，检测波长为314nm，色谱柱温度为室温。

(3)取(1)的混合样品溶液20μl注入液相色谱仪，完成非布司他原料药及其中间体的分离与分析。

本发明通过选择适当的固定相和流动相，以及适当的测定条件，为准确的完成非布司他的分析分离提供一种可靠的方法。

附图说明

图1：按照实施例1条件分离的非布司他原料药及其中间体HPLC图

图2：按照实施例2条件分离的非布司他原料药及其中间体HPLC图

图3：按照实施例3条件分离的非布司他原料药及其中间体HPLC图

具体实施方式：

实施例1

仪器：SHIMADZU LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外检测器；

色谱柱：C18(250×4.6mm，5μm)；

流动相：0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至3.0)-(甲醇-四氢呋喃)(80∶20)＝25∶75

流速：1.0mL/min

检测波长：314nm

柱温：室温

进样体积：20μl

试验步骤

称取非布司他与中间体各10mg，同置于10ml量瓶中，加甲醇-四氢呋喃(4∶1)溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为混合样品溶液；另分别称取非布司他及中间体，分别置于10ml量瓶中，加甲醇-四氢呋喃(4∶1)溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为定性对照溶液。

分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见图1。图1中1号峰为中间体1，2号峰为非布司他主峰，3号峰为中间体2，4号峰为中间体3，5号峰为中间体5，6号峰为中间体4；可以观察到在该条件下，非布司他主峰与其他5个中间体分离完全，非布司他主峰时间在6.7min左右。

实施例2

仪器：LC-10AT高效液相色谱仪；岛津SPD-10A紫外检测器；

色谱柱：C18(250×4.6mm，5μm)